目的：研究大鼠正常皮膚體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞在加入外源性硫化氫和胱硫醚-γ-裂解酶抑制劑后，細(xì)胞培養(yǎng)后上清液硫化氫含量及其生成酶胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表達(dá)水平的變化規(guī)律，探討大鼠皮膚成纖維細(xì)胞是否存在硫化氫/硫醚-γ-裂解酶體系。方法：大鼠正常皮膚成纖維細(xì)胞為研究對象，按照正常的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)和傳代，取第4代的成纖維細(xì)胞，隨機(jī)分為空白對照組、實驗對照組、NaHS組和PPG組。在細(xì)胞培養(yǎng)板上每組設(shè)立3個副孔，每孔置入相同濃度和數(shù)量的成纖維細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)48小時后，進(jìn)行細(xì)胞同步化并加入不同濃度的干預(yù)劑，繼續(xù)培養(yǎng)24h收集細(xì)胞上清液及細(xì)胞。用敏感硫電極測定細(xì)胞上清液H2S含量，用Trizol法提取成纖維細(xì)胞總RNA并鑒定后RT-PCR測定CSE mRNA基因表達(dá)水平。結(jié)果：NaHS組細(xì)胞上清液H2S含量較空白對照組、實驗對照組增高（P<0.05），PPG組細(xì)胞上清液H2S含量較空白對照組、實驗對照組降低（P<0.05），空白對照組、實驗對照組、NaHS組（N1,N2,N3）、PPG組（P1,P2,P3）各組間對比大鼠正常皮膚成纖維細(xì)胞CSE mRNA表達(dá)水平均無顯著... 

【文章來源】：青海大學(xué)青海省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：38 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗條件
    2.2 主要試劑
    2.3 主要儀器
    2.4 主要溶液配置
    2.5 測定指標(biāo)及方法
    2.6 成纖維細(xì)胞培養(yǎng)
        2.6.1 細(xì)胞培養(yǎng)、換液
        2.6.2 細(xì)胞傳代
        2.6.3 細(xì)胞計數(shù)
    2.7 實驗分組及技術(shù)路線圖
    2.8 敏感硫電極測上清液 H2S 濃度
        2.8.1 細(xì)胞處理
        2.8.2 上清液收集及 H2S 濃度測定
    2.9 RT-PCR 測細(xì)胞 CSE MRNA 表達(dá)水平
        2.9.1 總 RNA 的提取
        2.9.2 RNA 的鑒定
        2.9.3 cDNA 制備和 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)
    2.10 統(tǒng)計方法
第3章 結(jié)果
    3.1 上清液硫化氫濃度
    3.2 RT-PCR 測 CSE MRNA
第4章 討論
第5章 結(jié)論
第6章 參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
    英文縮略詞
    實驗儀器
    實驗試劑
    實驗操作圖片
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]外源性硫化氫對大鼠深Ⅱ°燒傷創(chuàng)面巨噬細(xì)胞數(shù)量和微血管數(shù)量的影響[J]. 張海瑞,李毅,王洪瑾.  青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2013(03)
[2]硫化氫對燒傷大鼠腸道組織干擾素-γ、腫瘤壞死因子-α含量的影響[J]. 孫超,李毅,王洪瑾.  中華損傷與修復(fù)雜志(電子版). 2013(02)
[3]氣體信號分子H2S體系同NO、CO體系之間的關(guān)系[J]. 李祥,關(guān)巍.  中華肺部疾病雜志(電子版). 2012(02)
[4]硫化氫對大鼠燒傷后炎癥反應(yīng)的影響[J]. 未培軒,李毅,王洪瑾,曾皓.  中華損傷與修復(fù)雜志(電子版). 2012(01)
[5]硫化氫與氧化應(yīng)激[J]. 王洪瑾,李毅.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2011(04)
[6]硫化氫對嚴(yán)重?zé)齻笫笾匾K器的影響[J]. 李毅,王洪瑾,宋學(xué)芳,楊惠蓮.  中華燒傷雜志. 2011 (01)
[7]硫化氫對嚴(yán)重?zé)齻缙诖笫笱錞NF-α及MDA含量變化的干預(yù)作用研究[J]. 吳貞天,李毅.  中華損傷與修復(fù)雜志(電子版). 2010(04)
[8]低O2高CO2性肺動脈高壓時大鼠肺組織硫化氫體系的變化及川芎嗪的干預(yù)[J]. 賈旭廣,石璐,林麗娜,汪洋,許益笑,王萬鐵.  中國病理生理雜志. 2010(03)
[9]內(nèi)源性氣體信號分子H2S研究進(jìn)展[J]. 周輝,高洪,嚴(yán)玉霖,周銘濤,肖鵬.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(06)
[10]中醫(yī)藥干預(yù)全身炎癥反應(yīng)綜合征研究概況[J]. 李越華.  遼寧中醫(yī)雜志. 2009(03)



本文編號：3172208