一、研究背景創(chuàng)傷是一個重要的全球公共衛(wèi)生問題,根據世界衛(wèi)生組織的統計數據,全球每6秒鐘就會有一個人遭受到創(chuàng)傷,每年有超過500萬人因創(chuàng)傷而死亡,約占全世界總死亡人數的10%,是瘧疾、結核病和艾滋病總和的1.7倍^[1]。損傷相關分子模式（Danger induced molecular patterns,DAMPs）是機體受到嚴重創(chuàng)傷后從受損細胞或細胞外基質中釋放到血液和組織液中的一類分子^[2,3]。這些DAMPs能夠被在哺乳動物細胞中表達的模式識別受體識別,觸發(fā)細胞內信號級聯反應,激活NF-k B等炎癥相關通路,誘導局部及全身炎癥反應^[4,5]。DAMPs種類很多,而這其中,細胞外游離核酸（包括DNA、RNA、micro RNA等）是重要的一類,在細胞壞死、組織損傷以及免疫細胞（如中性粒細胞和單核細胞）被激活產生NETs過程中釋放進入血液循環(huán),能夠被免疫炎癥細胞的TLR3、7、8、9等核酸識別受體所識別,誘發(fā)機體局部或全身炎癥反應,進而最終導致多器官功能障礙等嚴重并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展^[6-8]。同時,創(chuàng)... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數】：96 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

創(chuàng)傷患者和健康者血漿中游離核酸分析結果。A,創(chuàng)傷患者和健康捐獻者血漿中游離dsDNA差別圖;B,創(chuàng)傷患者和健康捐獻者血漿中游離microRNA差別圖。

在本部分實驗中,根據前期加入不同體積的血漿對TLR的激活效果的摸索,最后統一使用了10μl健康者或創(chuàng)傷病人血漿刺激TLR3和TLR9,結果如圖1-2所示,與健康捐獻者血漿相比,創(chuàng)傷患者血漿能夠明顯激活TLR3和TLR9,且此激活效應能夠被5μg/ml的聚陽離子材料HPT所抑制。(四)HDF DAMPs激活TOLL樣受體

在本部分研究中,主要采用了兩種方法制作細胞損傷模型,分別是反復凍融法和超聲破碎法。兩種損傷模型均可以造成細胞的不可逆行損傷和死亡,在離心去除細胞殘渣后獲得DAMPs,通過DNA及RNA試劑盒檢測并標定DAMPs中的DNA和RNA含量。為了更好的顯示DAMPs對不同TLR的激活能力,在以下實驗中刺激TLR時均采用DNA濃度作為統一參照。TLR3、TLR8和TLR9分別是識別dsRNA、ssRNA和非甲基化DNA的核酸受體,在炎癥中起著重要的作用,為了使加入的DAMPs的量保持一致,使用了DNA溶度分別為10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml和1μg/ml的DAMPs刺激TLRs,實驗發(fā)現兩種DAMPs均能有效激活TLR3,TLR8和TLR9,且整體呈劑量依賴性趨勢。本實驗證明了細胞在受到損傷后在其死亡以及死亡的過程中能夠向胞外釋放游離的DNA和RNA,而這些游離的DNA和RNA可以進一步激活TLR,誘導機體炎癥反應。2. HDF DAMPs來源的基因組DNA不能激活TLR9,而RNA能夠激活TLR3


本文編號：3143416