目的:應(yīng)用攜帶有C57BL/6小鼠白細(xì)胞介素-10（IL-10）基因的慢病毒轉(zhuǎn)染人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs）,構(gòu)建IL-10修飾的hAMSCs（IL-10-hAMSCs）,初步探討IL-10-hAMSCs對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面愈合相關(guān)因子的調(diào)控作用中hAMSCs與IL-10同時(shí)發(fā)揮的作用。方法:1.無(wú)菌條件下提取30歲以下健康產(chǎn)婦剖宮產(chǎn)胎盤(pán)羊膜,使用胰蛋白酶+膠原酶二步法體外分離提取出hAMSCs,無(wú)菌清潔孵箱中培養(yǎng),提純傳代至3-5代后予以凍存后備用。2.由重慶綠澤森生物有限公司合成C57B6/L小鼠IL-10基因,使用慢病毒作為基因載體并攜帶GFP熒光蛋白,對(duì)hAMSCs進(jìn)行轉(zhuǎn)染以得到IL-10-hAMSCs,使用熒光倒置顯微鏡鏡下觀察綠色熒光表達(dá)情況以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。3.取8周齡的C57B6/L小鼠120只圖表法隨機(jī)分別為:（1）對(duì)照組,（2）hAMSCs組、（3）IL-10-hAMSCs組、每組40只。濃度4%水合氯醛溶液行麻醉后沿背部脊柱等距離對(duì)稱制作全層皮膚缺損創(chuàng)面模型（1.0×1.0cm）,對(duì)照組小鼠... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1AhAMSCs原代接種24h后細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)貼壁（100×）；圖1BhAMSCs原代接種72h后（100×）；圖

圖 2圖 2A：hAMSCs 轉(zhuǎn)染 白光（200×）； 圖 2B：hAMSCs 轉(zhuǎn)染 熒光（200×）2.3 C57BL/6 小鼠背部皮膚全層缺損創(chuàng)面的制作及分組：將麻醉后剃毛的小鼠使用中性筆沿脊柱劃線后對(duì)稱設(shè)計(jì) 1.0cm×1.0cm 的全層皮膚缺損創(chuàng)面，使用顯微組織剪或眼科剪制作創(chuàng)面。建模方法如下：ABCI

表 1 小鼠分組及干預(yù)方式分別于建模后第 1、3、7、14 天取材，拍照結(jié)果顯示 IL-10-hAMSCs 愈合速度相比 hAMSCs 快，愈合質(zhì)量最佳，對(duì)照組創(chuàng)面愈合速度最慢，瘢明顯。組別 干預(yù)方式 注射量 樣對(duì)照組 PBS 200μl hAMSCs 組 hAMSCs 200μl (5×105/100μl) IL-10-hAMSCs 組 IL-10-hAMSCs 200μl (5×105/100μl)


本文編號(hào)：2920939