【摘要】：目的: 通過對(duì)TLR4基因突變型（TLR4-/-）C3H/HeJ小鼠和野生型C3H/HeN小鼠行大腦中動(dòng)脈栓塞術(shù)，建立腦缺血再灌注損傷模型，觀察小鼠神經(jīng)功能學(xué)的變化，，并通過檢測(cè)小鼠腦梗死體積、缺血再灌注后腦細(xì)胞形態(tài)變化，以及檢測(cè)在蛋白水平和mRNA水平S100A8和S100A9的表達(dá)變化，探討S100A8、S100A9和TLR4在腦缺血再灌注損傷中的作用及可能機(jī)制，從而為從炎癥介質(zhì)途徑尋求預(yù)防腦缺血再灌注損傷提供新的切入點(diǎn)。 方法: 選用三月齡SPF級(jí)突變型C3H/HeJ小鼠30只，野生型C3H/HeN小鼠30只，體重20-25克，均飼養(yǎng)于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫保持在(24±2)℃，相對(duì)濕度60±5%，光線按正常晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)，將動(dòng)物隨機(jī)分為野生型正常組（C3H/HeN Control, n=12），突變型正常組(C3H/HeJ Control，n=12)，野生型模型組(C3H/HeN Model，n=18)以及突變型模型組（C3H/HeJ Model，n=18），評(píng)價(jià)模型組神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死體積。取腦缺血再灌注24小時(shí)的腦片行免疫組化檢測(cè)S100A8和S100A9的蛋白表達(dá)，以及應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)S100A8和S100A9在mRNA水平上的相對(duì)表達(dá)量。 結(jié)果: 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)C3H/HeN神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分明顯高于C3H/HeJ組（P0.01）；再灌注24小時(shí)后，C3H/HeJ組腦梗死體積明顯小于C3H/HeN組（P0.01），HE染色發(fā)現(xiàn)C3H/HeN模型組神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂，部分細(xì)胞空泡變，細(xì)胞核大小不一，部分濃縮凝固，C3H/HeJ模型組神經(jīng)細(xì)胞排列較野生型模型組整齊，水腫、變性壞死明顯減輕；免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)C3H/HeN正常組和C3H/HeJ正常組S100A8和S100A9陽性蛋白表達(dá)細(xì)胞數(shù)目較少，各組差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是再灌注24h后，各模型組中S100A8和S100A9陽性蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)（P0.01），且C3H/HeN模型組較C3H/HeJ模型組S100A8和S100A9表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)目增加更為明顯（P0.01）；RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)各模型組S100A9和S100A8mRNA表達(dá)量較正常組均顯著增加（P0.01），但是C3H/HeJ模型組S100A9和S100A8mRNA表達(dá)較C3H/HeN模型組有所減少（P0.05）。 結(jié)論: S100A8和S100A9參與了腦缺血再灌注損傷的早期過程，且很有可能作為內(nèi)源性TLR4配體通過活化TLR4信號(hào)通路來介導(dǎo)早期腦I/R損傷。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R651.15

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2585125