【摘要】：失血性休克(Hemorrhagic shock, HS)能夠通過啟動機(jī)體固有免疫系統(tǒng),觸發(fā)全身炎癥反應(yīng),甚至導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome, MODS)的發(fā)生。這一病理過程中,炎癥啟動的機(jī)理尚不明了。IL-1β在休克后全身炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic inflammatory response syndrome, SIRS)中有著重要的作用,炎癥小體控制著IL-1β的成熟和釋放。Pyrin蛋白由781個(gè)氨基酸組成,通過與核苷酸結(jié)合寡聚化域樣受體蛋白(Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein, NLRP)相互作用,可以抑制炎癥小體的活化。內(nèi)毒素(Lipopolysaccharide, LPS)以及細(xì)胞因子能夠誘導(dǎo)Pyrin蛋白表達(dá)增加；在巨噬細(xì)胞,白細(xì)胞介素(Interluekin-10, IL-10)能夠誘導(dǎo)Pyrin的表達(dá)上調(diào)。本課題試圖證實(shí)失血性休克后,IL-10水平下調(diào),Pyrin表達(dá)降低,炎癥小體的活化失去負(fù)向調(diào)控,進(jìn)而IL-1β在肺臟內(nèi)的成熟及分泌增加,炎癥反應(yīng)過程進(jìn)一步被放大。研究結(jié)果顯示,LPS在肺內(nèi)激活了NLRP3炎癥小體的同時(shí),也通過誘導(dǎo)IL-10上調(diào)了Pyrin的表達(dá),抑制了炎癥小體的活化。更為重要的是,LPS介導(dǎo)的IL-10能夠上調(diào)Pyrin表達(dá),在炎癥后期,Pyrin通過抑制炎癥小體活化,控制了炎癥反應(yīng)的發(fā)展。失血性休克后,IL-10在肺巨噬細(xì)胞(Alveolar macrophages, AM)內(nèi)的表達(dá)減少,Pyrin在AM以及肺內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)降低,進(jìn)而炎癥小體活化增強(qiáng),IL-1β分泌增加。本課題提出并闡釋了新的失血性休克后炎癥反應(yīng)啟動機(jī)制：失血性休克抑制了LPS介導(dǎo)的NLRP3炎癥小體活化和IL-1β分泌的負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制。 第一部分：失血性休克增強(qiáng)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肺組織內(nèi)NLRP3炎癥小體活化 1.內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肺組織內(nèi)NLRP3炎癥小體活化能夠被失血性休克所增強(qiáng) 通過測定NLRP3和ASC的結(jié)合以及caspase-1的剪切成熟來判斷肺內(nèi)炎癥小體的活化情況。通過野生型及NLPR3-/-小鼠,在失血性休克復(fù)蘇后2小時(shí)氣管內(nèi)給予LPS或生理鹽液注射,應(yīng)用免疫共沉淀及免疫印跡方法測定肺組織NLRP3及ASC的結(jié)合以及caspase-1的剪切成熟,ELISA方法測定肺泡灌洗液中IL-1β水平。結(jié)果表明,失血性休克通過激活NLPR3-/-炎癥小體從而增加了IL-1β的成熟、分泌。 2.肺巨噬細(xì)胞在肺組織炎癥小體活化中起主要作用 為明確肺巨噬細(xì)胞在肺組織的炎癥小體活化中所起的作用,小鼠失血性休克復(fù)蘇2小時(shí)后進(jìn)行肺泡灌洗,利用免疫磁珠分離系統(tǒng)純化得到肺巨噬細(xì)胞。肺巨噬細(xì)胞體外給予LPS刺激(1μg/ml),測定炎癥小體活化、caspase-1剪切成熟及IL-1β的釋放。相比假手術(shù)組,在失血性休克組來源的肺巨噬細(xì)胞中,給予LPS刺激后,發(fā)生了更為顯著的NLRP3和ASC結(jié)合、caspase-1剪切以及IL-1β釋放。LPS誘導(dǎo)的肺組織及肺巨噬細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎癥小體活化能夠被失血性休克所增強(qiáng)。 第二部分：失血性休克與Pyrin蛋白對肺組織炎癥小體活化的作用機(jī)制研究 1.失血性休克損害了肺內(nèi)Pyrin蛋白表達(dá)上調(diào) Pyrin蛋白被認(rèn)為能夠抑制caspase-1活化及IL-1β成熟釋放(13,20)。為明確失血性休克后,Pyrin蛋白對肺內(nèi)炎癥小體活化的調(diào)節(jié),首先測定了失血性休克和／或LPS刺激后Pyrin蛋白在肺組織及巨噬細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平。在HS-LPS“兩次打擊”后,失血性休克明顯降低了Pyrin蛋白在肺內(nèi)的表達(dá)。小鼠肺巨噬細(xì)胞體外LPS刺激后,得到了類似的結(jié)果：LPS刺激后,假手術(shù)組來源的肺巨噬細(xì)胞Pyrin蛋白表達(dá)上調(diào),而失血性休克組,失血性休克明顯削弱了LPS誘導(dǎo)的Pyrin表達(dá)增加。 2.失血性休克通過削弱IL-10產(chǎn)生抑制了Pyrin蛋白表達(dá) 有文獻(xiàn)報(bào)道,IL-10可以通過Jak3, Stat6以及NF-κB途徑來誘導(dǎo)Pyrin蛋白的表達(dá)(20)。我們先前研究已經(jīng)證明失血性休克降低了IL-10的表達(dá),從而肺部炎癥反應(yīng)加重(29)。本研究中,我們進(jìn)一步證實(shí),通過TLR4及MyD88信號通路,LPS誘導(dǎo)了IL-10的肺內(nèi)表達(dá)。在假手術(shù)和失血性休克組,外源性IL-10明顯誘導(dǎo)了Pyrin蛋白在肺內(nèi)的表達(dá)；重組IL-10與LPS復(fù)合注射,誘導(dǎo)了更高的表達(dá)量；而給予IL-10中和性抗體,無論假手術(shù)組或失血性休克組,Pyrin蛋白表達(dá)未見增加。以上研究表明,IL-10表達(dá)上調(diào)受損,導(dǎo)致了HS-LPS“兩次打擊”后Pyrin蛋白表達(dá)上調(diào)被抑制,炎癥晚期更為明顯。 3. Pyrin蛋白表達(dá)減少導(dǎo)致了失血性休克介導(dǎo)的炎癥小體激活 為論證IL-10、Pyrin蛋白以及NLRP3炎癥小體之間的關(guān)系,我們運(yùn)用了siRNA技術(shù),使鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞(Mouse lung vascular endothelial cell, MLVEC)內(nèi)Pyrin蛋白表達(dá)沉默。轉(zhuǎn)染后48小時(shí),在LPS或IL-10誘導(dǎo)下,MLVEC細(xì)胞中Pyrin蛋白表達(dá)明顯受損,LPS誘導(dǎo)的NLRP3-ASC結(jié)合明顯增加,caspase-1剪切以及IL-1β釋放也明顯增加。Pyrin蛋白敲除后,即使給予外源性重組IL-10,MLVEC田胞的炎癥小體活化及IL-1β釋放并未減少,提示IL-10降低炎癥小體活化的作用是通過Pyrin蛋白介導(dǎo)的。 綜上所述,我們獲得以下結(jié)論： 1.失血性休克能夠增強(qiáng)LPS誘導(dǎo)的肺部炎癥小體活化； 2.肺巨噬細(xì)胞在肺組織炎癥小體活化中起主要作用； 3.失血性休克后抑炎因子IL-10表達(dá)受損,導(dǎo)致肺部炎癥增強(qiáng)； 4.失血性休克通過削弱IL-10產(chǎn)生從而抑制了Pyrin蛋白表達(dá)； 5. Pyrin蛋白表達(dá)減少導(dǎo)致了失血性休克介導(dǎo)的炎癥小體激活。 本研究揭示了失血性休克致炎的新的機(jī)制,失血性休克通過抑制了LPS刺激后的炎癥小體活化負(fù)反饋調(diào)節(jié)通路,能夠增加促炎因子IL-1β的肺內(nèi)表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)了炎癥的發(fā)展。研究失血性休克后炎癥反應(yīng)中IL-10和Pyrin蛋白的調(diào)節(jié)規(guī)律,具有啟發(fā)性意義。維持IL-10和/或Pyrin的表達(dá)或許能夠?yàn)槭а孕菘撕笱装Y反應(yīng)的治療提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R459.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 夏亞欽;文琛;;針刺“人中”對失血性休克家兔心肌的組織化學(xué)觀察[J];針刺研究;1985年04期

2 卞善述;失血性休克患者的補(bǔ)液[J];國際護(hù)理學(xué)雜志;1986年06期

3 吳英杰,何三光;微小回腸血管平滑肌瘤引起嚴(yán)重失血性休克一例[J];中國實(shí)用外科雜志;1987年10期

4 范鐳,韓濟(jì)生;大鼠失血性休克時(shí)脊髓中腦啡肽的釋放增多[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1989年04期

5 黃培志;;失血性休克犬的深低溫循環(huán)暫�！砗湍X代謝的初步研究[J];國際骨科學(xué)雜志;1991年04期

6 甘卉,趙雪儉,趙丹,李楊,王忠山;人參二醇組皂甙對失血性休克犬血糖含量的影響[J];中國病理生理雜志;1992年03期

7 張華云;劉懷瓊;黃麗娜;;失血性休克液體復(fù)蘇中血液稀釋度的改變[J];中華創(chuàng)傷雜志;1992年03期

8 陳虹;馬潤仙;郭建平;;平衡液在搶救失血性休克中的應(yīng)用[J];中國社區(qū)醫(yī)師;1993年10期

9 蔣建新，陳惠孫，，胡德耀;內(nèi)源性內(nèi)毒素移位在失血性休克中的作用及其分子機(jī)理研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1995年06期

10 丁建國;;大量快速輸液糾正治療失血性休克[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;1996年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張曄;徐競;劉建倉;張連陽;;VASP調(diào)節(jié)失血性休克大鼠小腸屏障功能與ZO-1的關(guān)系[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

2 徐競;劉良明;;失血預(yù)處理對失血性休克大鼠血管反應(yīng)性和鈣敏感性的保護(hù)作用及與PKCα、PKCε的關(guān)系[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

3 張近波;潘景業(yè);李智強(qiáng);陳潔;王曉蓉;王衛(wèi);;參附注射液對失血性休克大鼠微循環(huán)血流量的影響[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

4 吳澤;那紅旭;鄧德銳;;失血性休克的法醫(yī)學(xué)鑒定[A];中國法醫(yī)學(xué)會全國第十次法醫(yī)臨床學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

5 張近波;潘景業(yè);李智強(qiáng);陳潔;姚震亞;吳雙華;沈曄;王衛(wèi);;失血性休克大鼠內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體表達(dá)的研究[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

6 王磊;王建;馬炳辰;;萬汶與賀斯在失血性休克容量復(fù)蘇中對凝血功能影響的比較[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十三次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會大會論文集[C];2010年

7 陳輝;鄭士友;;高滲鹽水用于失血性休克初期急救77例體會[A];華東地區(qū)第二次急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];1993年

8 于湘珠;汪寧爾;王芳;胡瑞瑛;孟茜芳;;婦產(chǎn)科隱性失血患者失血性休克早期診斷指標(biāo)的探討[A];2004年全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

9 陳俊杰;;失血性休克法醫(yī)學(xué)鑒定探討[A];全國第七次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文摘要集[C];2004年

10 施燮民;張林;嚴(yán)龍;;失血性休克的認(rèn)定要點(diǎn)探討[A];中國法醫(yī)學(xué)會全國第九次法醫(yī)臨床學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 申玉萍;失血性休克患者輸血時(shí)應(yīng)注意的問題[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

2 ;失血性休克診斷與救治[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

3 楊世偉;基層醫(yī)院處理失血性休克例舉[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2005年

4 王寶華 李水根;高滲鹽溶液治失血性休克[N];健康報(bào);2004年

5 羅剛;低血壓并非休克同義詞[N];健康報(bào);2007年

6 宋桂芳;中小企業(yè)“失血性休克”能否救治[N];友報(bào);2009年

7 伏新順;肝硬化病人當(dāng)心魚刺“惹禍”[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2006年

8 記者　劉麟;長沙：有位見義勇為青年叫韋黎[N];經(jīng)濟(jì)日報(bào);2006年

9 伏新順;大便出血為哪般[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2007年

10 湖南郴州市第一人民醫(yī)院副主任醫(yī)師 雷冬竹;基層醫(yī)生對產(chǎn)后出血處理要得法[N];健康報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 徐鵬;失血性休克后Pyrin在肺NLRP3炎癥小體活化中的作用及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 王新友;腹腔途徑輔助復(fù)蘇失血性休克大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

3 李立波;失血性休克后腸系膜淋巴液對中性粒細(xì)胞活化作用以及高滲氯化鈉復(fù)蘇對其的影響[D];浙江大學(xué);2006年

4 姜久昆;生理鹽水、高滲氯化鈉和羥乙基淀粉復(fù)蘇失血性休克大鼠對Treg、Th1/Th2及Tc1/Tc2早期影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];浙江大學(xué);2011年

5 張育tF;重癥失血性休克及復(fù)蘇條件下大鼠VAP-1表達(dá)規(guī)律及調(diào)控機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 周彬;高滲鹽對失血性休克液體復(fù)蘇的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

7 吳長毅;血紅素加氧酶-1重組乳酸乳球菌灌胃對失血性休克大鼠腸道屏障的保護(hù)作用[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

8 段朝軍;解凍的新鮮冰凍血漿復(fù)蘇失血性休克與血管保護(hù)機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2010年

9 溫宗梅;NOD2信號通路在失血性休克/復(fù)蘇后急性肺損傷中作用機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 鄭偉;急性重度失血性休克條件下大鼠血漿和肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 鄭文建;失血性休克及復(fù)蘇后大鼠UCP2變化與組織差異性損傷關(guān)系的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 劉玉春;輸液溫度對失血性休克兔循環(huán)呼吸功能和血生化指標(biāo)的影響[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2003年

3 王波;自體血液回輸用于腹部傷連續(xù)失血性休克救治的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

4 袁靜;IκB激酶在失血性休克繼發(fā)急性肺損傷中的作用及山茛菪堿的干預(yù)研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 隋金玲;早期限制性液體復(fù)蘇對創(chuàng)傷失血性休克的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

6 吳彬;CD40/CD40L在兔失血性休克致肺損傷中的表達(dá)及作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

7 張愛華;創(chuàng)傷非控制出血性休克早期限制性液體復(fù)蘇的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 葉小豐;電針足三里抗失血性休克及增強(qiáng)迷走傳出活性的實(shí)驗(yàn)研究[D];武漢大學(xué);2005年

9 王林貴;高壓氧對失血性休克復(fù)蘇后炎癥反應(yīng)的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

10 劉紅梅;高滲鹽水治療未控制出血性休克大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

本文編號：2518009