【摘要】：目的顱腦損傷(TBI)是導(dǎo)致死亡和殘疾的主要病因之一,并且會(huì)導(dǎo)致長(zhǎng)期的神經(jīng)功能損傷。流行病學(xué)證據(jù)顯示TBI是導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素之一。單次顱腦損傷及反復(fù)顱腦損傷均可導(dǎo)致神經(jīng)退行性變的發(fā)生發(fā)展。但是否反復(fù)顱腦損傷之間的損傷累積效應(yīng)在神經(jīng)退行性變中發(fā)揮著重要的作用仍是不清楚的。因此,在本研究中,我們通過(guò)皮質(zhì)控制損傷儀來(lái)建立SD大鼠的單次及反復(fù)顱腦損傷模型,通過(guò)此外傷模型來(lái)研究反復(fù)顱腦損傷過(guò)程中的損傷累積效應(yīng)對(duì)顱腦損傷后慢性神經(jīng)行為學(xué)及神經(jīng)病理學(xué)變化的病理機(jī)制研究。方法選取8周齡的SD大鼠(體重200g±10g),使用皮質(zhì)控制損傷儀(CCI)來(lái)制備顱腦損傷動(dòng)物模型。SD大鼠按照數(shù)字表法隨機(jī)分為4組:單次輕度顱腦損傷組(s TBI)、單次輕度顱腦損傷對(duì)照組(s-ctl)、反復(fù)輕度顱腦損傷組(r TBI)、反復(fù)輕度顱腦損傷對(duì)照組(r-ctl)。顱腦損傷模型制備24小時(shí)后作為損傷后第1天。通過(guò)改良大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分(m NSS)分別檢測(cè)顱腦損傷后第1天、第3天、第7天、第14天及第30天神經(jīng)行為變化。通過(guò)Morris水迷宮檢測(cè)損傷后30天空間學(xué)習(xí)和記憶功能。神經(jīng)元免疫熒光檢測(cè)損傷后不同時(shí)間點(diǎn)的神經(jīng)元缺失情況。小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)損傷后不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)炎癥反應(yīng)情況,ELISA檢測(cè)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的炎癥因子表達(dá)情況。WB檢測(cè)損傷后不同時(shí)間點(diǎn)的tau蛋白及APP蛋白表達(dá)變化情況。結(jié)果神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,反復(fù)輕度顱腦損傷較單次顱腦損傷導(dǎo)致更為嚴(yán)重的神經(jīng)行為學(xué)預(yù)后,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。m NSS顯示損傷后不同時(shí)間點(diǎn)r TBI組較s TBI組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分高,表示反復(fù)顱腦損傷導(dǎo)致的神經(jīng)行為學(xué)損傷更嚴(yán)重(F3,40=649.57,P0.0001)。Morris水迷宮結(jié)果顯示反復(fù)顱腦損傷后第25天到29天的逃避潛伏期時(shí)間較s TBI組明顯延長(zhǎng)(F4,112=393.19,P0.001)。損傷后第30天目標(biāo)象限百分比結(jié)果顯示,r TBI組較s TBI組比例明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F3,12=32.38,P0.001)。免疫熒光檢測(cè)神經(jīng)元結(jié)果顯示,在損傷后的腦皮質(zhì)區(qū)域及海馬區(qū)域均出現(xiàn)神經(jīng)元缺失現(xiàn)象,且r TBI組較s TBI神經(jīng)元缺失現(xiàn)象更為嚴(yán)重。小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞活化在損傷后7天達(dá)到高峰,損傷測(cè)皮質(zhì)及海馬組織在相同檢測(cè)時(shí)間點(diǎn),r TBI組較s TBI組活化的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量多,且損傷后30天在r TBI組內(nèi)仍可檢測(cè)到較多活化的膠質(zhì)細(xì)胞。ELISA檢測(cè)損傷后腦組織中的炎性因子結(jié)果與免疫熒光結(jié)果相一致。炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-10)在損傷后7天達(dá)到高峰,且r TBI組在不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)的促炎因子(TNF-α及IL-6)均高于s TBI組。WB檢測(cè)異常蛋白表達(dá)結(jié)果顯示,APP蛋白隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)增加,且r TBI較s TBI表達(dá)高,而tau蛋白及P-tau蛋白在兩組之間并無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論顱腦損傷的累積效應(yīng)導(dǎo)致了更嚴(yán)重的神經(jīng)行為學(xué)及神經(jīng)病理學(xué)預(yù)后。而這種損傷的累積效應(yīng)增強(qiáng)了損傷后的炎癥反應(yīng),同時(shí)持續(xù)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)可能導(dǎo)致了神經(jīng)元的缺失及異常蛋白的持續(xù)表達(dá),這為干預(yù)治療顱腦損傷后的神經(jīng)退行性變提供了可能。
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圖片說(shuō)明： 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2.結(jié)果2.1 單次及反復(fù)顱腦損傷后的大體觀我們通過(guò)解剖損傷后的 SD 大鼠來(lái)觀察單次顱腦損傷及反復(fù)顱腦損傷對(duì)腦實(shí)質(zhì)的損傷情況。圖 2.1 為損傷后即刻麻醉處死大鼠，解剖腦組織，拍照獲得腦實(shí)質(zhì)整體觀 A、C 及腦組織損傷灶處冠狀切面 B、D 大體觀。圖 2.1（A 和 B）是經(jīng)歷四次輕度顱腦損傷打擊的大鼠腦實(shí)質(zhì)的大體觀。圖 2.1（C 和 D）是經(jīng)歷單次輕度顱腦損傷打擊的大鼠腦實(shí)質(zhì)的大體觀。我們可以從圖片中觀察到較單次輕度顱腦損傷組相比較，反復(fù)輕度顱腦損傷打擊造成了明顯的損傷灶及腦實(shí)質(zhì)出血。而單次輕度顱腦損傷并未造成明顯的腦實(shí)質(zhì)損傷及損傷灶出血。
文內(nèi)圖片：
圖片說(shuō)明： 19圖 2.2 腦組織 HE 染色：反復(fù)輕度顱腦損傷組損傷后 3 天（A），反復(fù)輕度顱腦損傷組損傷后 30 天（C），單次輕度顱腦損傷組損傷后 3 天（B），單次輕度顱腦損傷組損傷后 30 天（D），放大倍數(shù) 50X。2.3 顱腦損傷后的 mNSS 神經(jīng)功能缺損評(píng)分結(jié)果通過(guò)對(duì)顱腦損傷后的運(yùn)動(dòng)功能、感覺(jué)功能、神經(jīng)反射等評(píng)估大鼠的神經(jīng)功能損傷情況。圖 2.3 為損傷后的神經(jīng)功能缺損評(píng)分。我們可以觀察到單次或反復(fù)顱腦損傷都造成了神經(jīng)行為學(xué)功能的損傷，隨著損傷后時(shí)間延長(zhǎng)，神經(jīng)行為學(xué)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R651.15

【參考文獻(xiàn)】

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1 Cindy Beharry;Leah S. Cohen;Jing Di;Kawsar Ibrahim;Susan Briffa-Mirabella;Alejandra del C. Alonso;;Tau-induced neurodegeneration: mechanisms and targets[J];Neuroscience Bulletin;2014年02期

本文編號(hào)：2513203