【摘要】：研究背景 成纖維細胞激活蛋白(Fibroblast activation protein, FAPa)是1986年由國外的學者Rettig等應用單克隆抗體F19(用體外培養(yǎng)的人成纖維細胞免疫小鼠獲得)從人類惡性黑色素瘤細胞株LOX當中識別的一種膜結合糖蛋白,它特異性表達活化的成纖維細胞(Fibroblast, FB)膜上,在正常成人靜息的FB上通常不表達或者表達水平很低。提示：FAPa是活化FB表面的標志物,在控制FB生長及胚胎發(fā)育、組織修復和上皮性腫瘤的演進過程中可能起一定的作用。 近三十年來,國內外有關FAPa的研究工作逐漸開展,大部分集中在組織器官纖維化和上皮性腫瘤的研究領域。大量的研究報道,FAPa在大多數(shù)上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用,其作用機制有以下幾種可能：(1)發(fā)揮其酶的功能,直接溶解與其相鄰的細胞外基質成分,協(xié)助腫瘤細胞的侵襲和參與腫瘤組織的重塑；(2)解離與基質蛋白結合的生長因子,使之發(fā)揮促生長作用；(3)參與腫瘤微血管的生成。目前FAPa已成為腫瘤治療的新型靶目標,成為腫瘤臨床與基礎研究的熱點,相關研究工作正在有序地開展,其中的不足之處仍在不斷改進。 FB作為重要的組織修復細胞,以活化的形式參與創(chuàng)面修復的各個階段,在創(chuàng)面修復過程中起重要的作用。FAPa作為活化FB表面的標志物,目前有關FAPa在創(chuàng)面修復與組織重建的研究領域開展較少,目前雖然已經明確FAPa在創(chuàng)面修復的早期階段及后期的瘢痕組織中均有不同程度的表達,但是FAPa在創(chuàng)面修復過程中的動態(tài)表達特點、生理作用及調控機制,迄今未見系統(tǒng)的研究和闡明。 研究目的 1.觀測FAPa在大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面修復過程中的動態(tài)表達特點。 2.觀測FAPa在成人病理性瘢痕組織中的表達特點。 3.初步探討FAPa在燙傷創(chuàng)面修復過程中可能的作用。 材料與方法 1.實驗動物分組：健康成年清潔級Wistar大鼠共48只,雌雄不限,體質量200-220g(南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供)。按統(tǒng)計學分組要求,隨機分為對照組和實驗組,對照組6只,實驗組42只。實驗組分為燙傷后6h、12h,1d、3d、7d、14d、21d7個分組,每分組6只。 2.深Ⅱ度燙傷模型的建立與組織獲取：Wistar大鼠燙傷模型借鑒文獻設計,于實驗前一天背部脫毛,0.3%戊巴比妥鈉(1ml/kg)腹腔注射麻醉。室溫下,將盛有56ml去離子水,直徑約3.0cm的燒瓶放入恒溫水箱中,加熱至燒瓶內的溫度為95℃時取出燒瓶,在溫度為90℃時,輕放在大鼠背部皮膚上15s,造成直徑約3.0cm大小的圓形深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面(經病理驗證為深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面)。傷后大鼠置室溫25℃環(huán)境中分籠飼養(yǎng),自由飲水、進食,每天更換創(chuàng)面敷料一次。分別在傷后預定時間斷頭處死,取創(chuàng)面中央處1.0cm×1.Ocm全層皮膚組織,1/2放入4%中性多聚甲醛中固定,用于免疫組織化學實驗,另1/2組織置于-80℃冰箱保存,用于Western blotting檢測試驗。對照組背部脫毛后直接斷頭處死,取與實驗組大鼠相同部位同等大小皮膚組織進行實驗。 3.病理性瘢痕組織的獲�。哼x擇南方醫(yī)院燒傷科因四肢深Ⅱ度燙傷后形成病理性瘢痕,需要手術治療的患者6例(診斷依靠病史及病理檢查,病變局部皮膚無破潰,患者無全身疾病),男女各半,年齡18-60歲,瘢痕形成時間10-14個月。在征得病人及其家屬同意后,手術切除病理性瘢痕的同時,在其周邊取少許正常皮膚組織作對照,標本置于-80℃冰箱保存,用于Western blotting檢測實驗。 4.觀測方法：應用免疫組織化學技術和Western blotting技術對FAPa的表達進行定位和半定量檢測。 5.統(tǒng)計學處理：數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件處理,計量資料以均數(shù)±標準差表示,對大鼠燙傷創(chuàng)面FAPa的灰度值行正態(tài)分布檢驗和方差齊性檢驗,符合正態(tài)分布、方差齊性。對大鼠燙傷創(chuàng)面修復過程中不同時間點FAPa的灰度值的統(tǒng)計分析采用one-way ANOVA,進一步多重比較采用SNK-q檢驗；成人病理性瘢痕組織及其周圍正常皮膚組織FAPa灰度值的統(tǒng)計分析,采用配對t檢驗。顯著性檢驗水平α=0.05,當P0.05時,差異有統(tǒng)計學意義。 實驗結果 1.免疫組織化學技術測得FAPa (+)的成纖維細胞被DAB染成棕色定位在創(chuàng)面真皮血管以及新生血管的血管壁和血管周圍。 2.以β-actin為內參,Western blotting技術測得對照組與實驗組各時間點大鼠背部皮膚組織FAPa的灰度值分別為31.67±3.20,84.67±8.71,106.00±11.75,118.33±13.44,117.33±8.62,140.33±15.92,106.17±15.77,79.83±9.30。實驗組各時間點FAPa的灰度值與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗組各時間點FAPa灰度值的總體均數(shù)不全相等,其中12h與1d,1d與3d比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),其余時間點FAPa的灰度值與相鄰時間點比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3.以β-actin為內參,Western blotting技術測得成人正常皮膚組織與病理性瘢痕組織中FAPa的灰度值分別為18.00±7.87,47.17±10.09,實驗組與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論 1. FAPa在大鼠正常皮膚組織中也有表達,深Ⅱ度燙傷后6h, FAPa的表達量已明顯增多,6h以后FAPa的表達量逐漸增多,并在燙傷后第7d達到高峰,7d后FAPa的表達量逐漸減少,至傷后第21d FAPa仍有較高水平的表達。 2. FAPa在成人正常皮膚與病理性瘢痕組織中均有表達,病理性瘢痕組織中的表達量高于正常皮膚組織。 3. FAPa在深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面修復過程中的表達特點與創(chuàng)面修復的炎癥反應、細胞增殖、創(chuàng)面收縮和再塑形幾個階段成纖維細胞的活動特點存在密切關系。提示,FAPa在燙傷創(chuàng)面修復過程中起一定作用。
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【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R644

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：2335508