【摘要】：目的：通過(guò)觀察大鼠燒傷血清對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖活性和成脂分化能力的影響，探索燒傷血清參與脂肪分解代謝的分子機(jī)制。研究燒傷對(duì)BALB/c小鼠棕色脂肪組織(brown adipose tissue, BAT)的影響。研究塞來(lái)昔布對(duì)燒傷BALB/c小鼠脂肪分解代謝的影響并探討其可能機(jī)制。 方法第一部分：選擇成年雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為假傷組及燒傷1d、4d、7d、14d、21d組，每組8只。各燒傷組大鼠制備背部30%TBSA Ⅲ度燙傷模型，分別于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)收集血清；假傷組只進(jìn)行假傷處理，取血清作為對(duì)照。采用各組血清培養(yǎng)3T3-Ll前脂肪細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，選擇細(xì)胞增殖最低組燒傷血清作為后續(xù)刺激血清。取3T3-Ll前脂肪細(xì)胞分別培養(yǎng)并分為假傷血清組、燒傷血清組、假傷血清成脂誘導(dǎo)組、燒傷血清成脂誘導(dǎo)組。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，誘導(dǎo)培養(yǎng)7d后進(jìn)行油紅O染色，進(jìn)行脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)并測(cè)量吸光度（A）值，實(shí)時(shí)定量PCR以及Western blot檢測(cè)過(guò)氧化物酶增殖體激動(dòng)劑受體（preoxisomeproliferator activated receptorγ，PPARγ）和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase, LPL）基因及蛋白表達(dá)。 方法第二部分：選擇BALB/c雄性小鼠40只，隨機(jī)分為對(duì)照組及燒傷組，每組20只。燒傷組采用BALB/c小鼠背部30%TBSA Ⅲ度燙傷模型，，觀察兩組間小鼠體重、體溫、體脂百分比、白色脂肪組織(white adipose tissue, WAT)和棕色脂肪組織(brown adipose tissue, BAT)重量、形態(tài)學(xué)變化，以及解偶聯(lián)蛋白-1(uncoupledprotein-1, UCP-1)表達(dá)水平的變化。 方法第三部分：選擇BALB/c雄性小鼠100只，隨機(jī)分為對(duì)照組、塞來(lái)昔布組、燒傷組及燒傷塞來(lái)昔布治療組，每組25只。采用BALB/c小鼠背部30%TBSAⅢ度燙傷模型，觀察研究各組間小鼠體重、體溫、體內(nèi)水含量、體內(nèi)脂肪含量、體內(nèi)肌肉含量、體脂百分比、EE、RER、VO2、VCO2、白色脂肪組織(white adipose tissue,WAT)和棕色脂肪組織(brown adipose tissue, BAT)重量、形態(tài)學(xué)變化，解偶聯(lián)蛋白-1(UCP-1)以及環(huán)氧酶-2(COX-2)基因及蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果第一部分： SD大鼠血清培養(yǎng)3T3-Ll前脂肪細(xì)胞研究中，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，與其余各組比較，燒傷4、7d組細(xì)胞增殖能力顯著降低，其中7d組細(xì)胞增殖活性最低，取燒傷7d大鼠血清作為后續(xù)刺激血清。倒置相差顯微鏡下觀察3T3-Ll細(xì)胞形態(tài)，假傷血清對(duì)照組、燒傷血清對(duì)照組對(duì)比無(wú)明顯變化；3T3-Ll前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)后假傷血清成脂誘導(dǎo)組、燒傷血清成脂誘導(dǎo)組3T3-Ll前脂肪細(xì)胞呈脂肪細(xì)胞樣變。其中假傷血清成脂誘導(dǎo)組成脂肪細(xì)胞量最多。油紅O染色示，假傷血清成脂誘導(dǎo)組3T3-Ll前脂肪細(xì)胞染色呈陽(yáng)性，燒傷血清成脂誘導(dǎo)組細(xì)胞為弱陽(yáng)性，其余均為陰性；油紅O染色后的脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)和油紅O染色定量比較，假傷血清組與燒傷血清組比較（P0.05）有顯著差異，假傷血清成脂誘導(dǎo)組與燒傷血清成脂誘導(dǎo)組比較（P0.05）有顯著差異。實(shí)時(shí)定量PCR及Western blot檢測(cè)示，燒傷血清組PPARγ基因表達(dá)量較假傷血清組明顯下降（P0.05），但LPL基因表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；PPARγ、LPL蛋白表達(dá)量假傷血清組和燒傷血清組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。燒傷血清導(dǎo)組誘導(dǎo)組PPARγ、LPL基因及蛋白表達(dá)量較假傷血清成脂誘導(dǎo)組均顯著下降（P0.05）。 結(jié)果第二部分：燒傷可引起B(yǎng)ALB/c小鼠棕色脂肪、白色脂肪形態(tài)學(xué)顯著變化。燒傷組小鼠的體重、WAT重量、白色脂肪體脂百分比均顯著低于對(duì)照組(P0.05)，燒傷組小鼠體溫、BAT重量、棕色脂肪體脂百分比及UCP-1蛋白表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P0.05）。 結(jié)果第三部分：燒傷組BALB/c小鼠體重、體內(nèi)水分、脂肪、肌肉含量、WAT重量、白色脂肪體脂百分與燒傷塞來(lái)昔布組比較顯著降低(P0.05)。燒傷組體溫、EE、VO2、VCO2、COX-2及UCP-1蛋白表達(dá)量與燒傷塞來(lái)昔布組比較顯著升高(P0.05)。各組之間小鼠活動(dòng)度比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：燒傷血清可引起3T3-Ll前脂肪細(xì)胞成脂分化能力下降。棕色脂肪在燒傷后脂肪高分解代謝中具有一定作用。COX-2抑制劑塞來(lái)昔布可降低燒傷后白色脂肪高分解代謝。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R644

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2327884