發(fā)布時(shí)間：2018-08-09 13:23

【摘要】：目的探討細(xì)胞自噬調(diào)控對(duì)脂多糖(LPS)刺激巨噬細(xì)胞引發(fā)炎癥反應(yīng)的影響及其分子機(jī)制。方法分離小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)分化獲得骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞,通過(guò)LPS刺激巨噬細(xì)胞建立炎癥反應(yīng)細(xì)胞模型。利用綠色熒光蛋白-微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(GFP-LC3)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染觀察自噬體的形成;利用3-甲基腺嘌呤(3-MA)和雷帕霉素(Rap)分別抑制和促進(jìn)細(xì)胞自噬,研究自噬干預(yù)對(duì)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)LC3B、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-12p40的mRNA水平,Western blot法檢測(cè)LC3B、核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白水平。結(jié)果 LPS刺激巨噬細(xì)胞2、4、6 h,誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞LC3B mRNA和蛋白高表達(dá),巨噬細(xì)胞中自噬體增加。與單獨(dú)LPS刺激相比,3-MA可抑制細(xì)胞自噬,顯著增加炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12p40 mRNA表達(dá),而Rap處理減少自噬數(shù)量,降低TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12p40 mRNA水平;自噬抑制后,可通過(guò)降低IκBα和增加p-NF-k Bp65的表達(dá)而影響NF-κB信號(hào)通路,進(jìn)而調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞因子表達(dá)。結(jié)論自噬可調(diào)控LPS刺激巨噬細(xì)胞引起的炎癥反應(yīng)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of autophagy regulation on the inflammatory response induced by lipopolysaccharide (LPS) stimulated macrophages and its molecular mechanism. Methods Murine bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and the macrophages derived from bone marrow were obtained by induced differentiation. The inflammatory response cell model was established by LPS stimulation of macrophages. The formation of autophagy was observed by transfection of green fluorescent protein-microtubule-associated protein-1 light chain 3 (GFP-LC3) plasmid, and 3-methyladenine (3-MA) and rapamycin (Rap) were used to inhibit and promote autophagy, respectively. To study the effect of autophagy intervention on the inflammatory response of macrophages induced by LPS, the levels of LC3B, TNF- 偽, IL-1 尾, IL-6 and IL-12p40 were detected by real-time PCR. The protein levels of LC3B, NF- 魏 B, NF- 魏 B inhibitory protein 偽 (I 魏 B 偽) were detected by Western blot. Results LPS stimulated macrophages for 6 h and induced the high expression of LC3B mRNA and protein, and the increase of autophagy in macrophages. Compared with the stimulation of LPS alone, 3-MA inhibited autophagy, significantly increased the expression of TNF- 偽, IL-1 尾, IL-6 and IL-12p40 mRNA, while Rap treatment decreased the number of autophagy and the levels of TNF- 偽, IL-1 尾, IL-6 and IL-12p40 mRNA. It can affect NF- 魏 B signaling pathway by decreasing I 魏 B 偽 and increasing the expression of p-NF-k Bp65, and then regulate the expression of inflammatory cytokines. Conclusion autophagy can regulate the inflammatory response of macrophages stimulated by LPS.
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家十二五科技重大專項(xiàng)(2012ZX10002004-006,2012ZX10004904-003-001,2013ZX10002002-006-001) 國(guó)家自然科學(xué)基金(81270532) 北京市自然科學(xué)基金(7162085) 首都特色臨床應(yīng)用研究(Z121107001012167) 北京市衛(wèi)生系統(tǒng)高層次衛(wèi)生技術(shù)人才培養(yǎng)計(jì)劃(2013-3-075) 北京市屬醫(yī)學(xué)科研院所公益發(fā)展改革試點(diǎn)項(xiàng)目(京醫(yī)研2016-2)
【分類號(hào)】：R575.3

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本文編號(hào)：2174206