【摘要】：膿毒癥患者發(fā)生遠(yuǎn)隔器官功能障礙的機(jī)制尚不明確，，針對(duì)膿毒癥還沒(méi)有確切有效的治療藥物。近年來(lái)， 腸-淋巴液‖假說(shuō)在休克、腸缺血/再灌注損傷、急性胰腺炎等動(dòng)物模型上得到驗(yàn)證，確認(rèn)了腸淋巴液途徑在遠(yuǎn)隔器官損傷中的作用，并應(yīng)用組學(xué)技術(shù)找到了休克和急性胰腺炎大鼠淋巴液中的差異蛋白質(zhì)。然而遺憾的是，作為最能模擬臨床過(guò)程的膿毒癥模型之一，盲腸結(jié)扎并穿孔（CLP）模型出現(xiàn)在腸淋巴液研究中的頻率相對(duì)低很多。本研究旨在探討腸淋巴液途徑在CLP大鼠繼發(fā)急性肺損傷中有無(wú)作用以及是否起主導(dǎo)作用，并尋找CLP大鼠胸導(dǎo)管淋巴液中有意義的差異蛋白質(zhì)，為繼續(xù)深入研究膿毒癥的早期標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)打下基礎(chǔ)。 第一部分胸導(dǎo)管淋巴液回流在盲腸結(jié)扎并穿孔大鼠急性肺損傷中的作用 目的：利用科赫法則逐一對(duì)腸淋巴液途徑在CLP大鼠繼發(fā)急性肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)從細(xì)胞因子水平評(píng)價(jià)淋巴液對(duì)CLP繼發(fā)膿毒癥的影響。 方法：1、結(jié)扎胸導(dǎo)管、阻斷淋巴液回流，阻止淋巴液與大鼠肺組織的接觸，觀察CLP大鼠生存率，檢測(cè)肺、肝、腎組織勻漿肺髓過(guò)氧化物酶（MPO）含量變化；2、從CLP大鼠術(shù)后6h和24h分離出來(lái)的淋巴液，再分別注射到正常大鼠體內(nèi)，檢測(cè)肺干濕重比、組織病理和肺組織勻漿MPO含量；3、CLP術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)分別留取淋巴液標(biāo)本，檢測(cè)其中促炎細(xì)胞因子IL-6和抗炎細(xì)胞因子IL-10含量變化。 結(jié)果：1、預(yù)先結(jié)扎胸導(dǎo)管（TDL）組CLP大鼠術(shù)后10天生存率顯著高于單純CLP處理組（90%vs.40%，p=0.029）；TDL+CLP組大鼠較單純CLP組肺組織病理?yè)p傷輕；TDL+CLP組大鼠肺MPO含量高于CLP組（102.8±11.41vs.85.67±35.21ng/mg Pro，p＜0.01），兩者都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組（p＜0.01）。2、注射CLP-6h淋巴液組大鼠肺組織病變最重，注射CLP-24h淋巴液組肺組織病理改變輕；注射CLP-6h淋巴液組大鼠肺MPO含量（81.96±30.63ng/mg Pro）遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他各組（p＜0.05），注射CLP-24h淋巴液組大鼠肺MPO含量（34.84±13.91ng/mg Pro）與對(duì)照組相比改變不大。3、淋巴液中IL-6和IL-10濃度比血液中的濃度高，CLP組高于假手術(shù)組，同時(shí)段的IL-6比IL-10濃度高。淋巴液中的IL-6、IL-10濃度在18h和24h均明顯降低，而血液中的IL-6、IL-10濃度在18h和24h仍有升高趨勢(shì)。 結(jié)論：CLP大鼠淋巴液含有能誘發(fā)急性肺損傷的物質(zhì)，并是血液中炎性細(xì)胞因子的來(lái)源之一，腸淋巴液途徑在CLP大鼠膿毒癥繼發(fā)遠(yuǎn)隔器官損傷的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。 第二部分CLP大鼠淋巴液蛋白質(zhì)組學(xué)及生物信息學(xué)分析 目的：針對(duì)CLP術(shù)后早期（6h）和后期（24h）大鼠胸導(dǎo)管淋巴液進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究，找到CLP特有的、以及CLP不同病程時(shí)段動(dòng)態(tài)變化的差異蛋白質(zhì)，并通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)分析這些差異蛋白質(zhì)相互之間的關(guān)系，推斷其中某些特定蛋白質(zhì)在膿毒癥發(fā)病機(jī)制中可能起的作用。 方法：采用iTRAQ技術(shù)對(duì)CLP大鼠胸導(dǎo)管淋巴液的蛋白質(zhì)組進(jìn)行定量分析，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法篩選差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，對(duì)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行Gene ontology、Pathway以及Network分析。 結(jié)果：1、共鑒定到有定量信息的蛋白質(zhì)984個(gè)，其中158個(gè)為顯著性差異蛋白質(zhì)（特征信息完整的有111個(gè)）。 2、差異蛋白質(zhì)總共對(duì)應(yīng)24個(gè)信號(hào)通路、29個(gè)代謝通路和10個(gè)疾病通路，有明確分子功能的蛋白質(zhì)以結(jié)合類蛋白質(zhì)占多數(shù)，其次是酶、激酶和酶抑制劑。 3、差異蛋白質(zhì)內(nèi)部構(gòu)建了基因網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖，158個(gè)蛋白質(zhì)的基因都有直接或間接的聯(lián)系。 4、通過(guò)生物信息學(xué)分析，以基因網(wǎng)絡(luò)圖中的5個(gè)蛋白質(zhì)再次構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖。 結(jié)論：CLP大鼠胸導(dǎo)管淋巴液與正常大鼠相比有多個(gè)差異蛋白質(zhì)，其中某些蛋白質(zhì)有可能成為膿毒癥器官功能損傷的早期標(biāo)志物或膿毒癥的治療靶點(diǎn)。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2147469