發(fā)布時間：2018-06-23 07:48

  本文選題：大鼠 + 自制脂肪乳劑��； 參考：《武漢大學》2013年博士論文

【摘要】：第一部分：高脂血癥合并重癥急性胰腺炎大鼠模型的建立與評價 目的：探索并建立高脂血癥大鼠合并重癥急性胰腺炎模型。 方法：40只SPF級雄性SD大鼠隨機分為兩組,正常飲食組與高脂飲食組,相應方法喂養(yǎng),其中高脂飲食組給予自制脂肪乳劑(配方：30%豬油+10%膽固醇+20%吐溫80+5%膽鹽+1%丙基硫樣嘧啶)1mL/100g劑量每日下午4時灌胃,兩周后再次分組。正常飲食組分兩個亞組,假手術組(SO組)與重癥急性胰腺炎組(SAP組)；高脂飲食組同樣分為高脂假手術組(HL組)和高脂血癥合并重癥急性胰腺炎組(HAP組)。 實驗前各組大鼠禁食12h,麻醉,消毒,開腹,使用逆行膽胰管注射�；悄懰徕c法造模,假手術組只僅反動十二指腸與胰腺。12h后,取材,檢測AMY、TC、 TG以及胰腺病理評分。 結果：TG、TC的血清水平在HL組和HAP組較SO組和SAP組均明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義均(P0.05)；對血清AMY指標進行對比HAP和SAP組比SO有明顯的差異,有統(tǒng)計學意義(P0.05),血清AMY在SO和HL對比沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。對比SO組、HL組與SAP以及HAP組的胰腺病理學評分可見SAP組與HAP組病理學評分較高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論：通過自制脂肪乳劑灌胃法制作高脂血癥模型方法可行,檢測TC、TG、指標均達到高脂血癥模型的要求。通過對SO和HAP、SAP和HL進行嚴格比較,排除自制脂肪乳劑灌胃制作導致胰腺炎發(fā)生的風險。高脂血癥合并重癥急性胰腺炎模型制作成功。第二部分：羅格列酮對高脂血癥大鼠合并重癥急性胰腺炎胰腺損傷的作用機制 目的：探討過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(peroxisomeproliferator-activated receptors-y, PPAR-y)激動劑羅格列酮(rosiglitazone, ROSI)對高脂血癥大鼠合并重癥急性胰腺炎(Severe Acute Pancreatitis, SAP)胰腺損傷的保護作用及其可能機制。 方法：120只SPF級雄性SD大鼠隨機分為正常飲食組(40只)和脂肪乳灌胃組(80只)。按照相應的飼喂方式分別喂養(yǎng)2周。結束喂養(yǎng)后將兩個大組分別隨機分成相應亞組,其中正常飲食組分為正常組(SO組)以及重癥急性胰腺炎組(SAP組)兩個亞組,而脂肪乳灌胃組則分為高脂血癥假手術組(HL組)、高脂血癥合并重癥急性胰腺炎組(HAP組)以及羅格列酮干預組(HRP組)、羅格列酮拮抗組(HRGP組),每組大鼠均為20只。 選擇逆行膽胰管注射牛黃膽酸鈉法制作SAP模型,對于假手術組,僅暴露和翻動十二指腸及胰腺即可,HRP組在造模前1h通過腹腔注射法給予羅格列酮干預,再做SAP模型,HRGP組注射ROSI前30mmin經(jīng)腹腔注射給予GW9662余操作HRP相同。造模完成后12h時剖殺大鼠取材,檢測血AMY, TG, TC水平；做胰腺病理切片,檢測胰腺病理學變化,并作病理評分；采用免疫組化法檢測胰腺NF-κB p65表達；選用Western Blot法檢測胰腺內(nèi)TNF-a和ICAM-1表達。 結果：對比血清TG, TC水平,脂肪乳劑灌胃各組水平均高于正常飲食組,其中HL組合HAP組與SO組合SAP組對比差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；對比血清AMY水平,HAP組較SAP組血清AMY水平較高(P0.05),而HRP組與HAP組對比AMY水平下降明顯(P0.05),但是HRGP組與HAP組對比雖有差異,但無統(tǒng)計學意義(P0.05)；其余指標如胰腺病理學評分、胰腺內(nèi)NF-κB、 TNF-a以及ICAM-1表達水平變化同AMY相似。 結論：對于高脂血癥合并胰腺炎大鼠,羅格列酮可以起到一定的保護作用,其機制可能和羅格列酮抑制NF-κB活性,降低TNF-a和ICAM-1表達有關。 第三部分羅格列酮對高脂血癥大鼠合并重癥急性胰腺炎肺損傷的作用機制研究 目的：探討過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(PeroxisomeProliferator-Activated Receptors-y, PPAR-y)激動劑羅格列酮(Rosiglitazone, ROSI)對高脂血癥大鼠合并重癥急性胰腺炎(Severe Acute Pancreatitis, SAP)肺損傷的保護作用及其可能機制。 方法：取SPF級雄性SD大鼠120只,自制脂肪乳劑1mL/100g劑量每日灌胃一次(配方：30%豬油+10%膽固醇+20%吐溫+5%膽鹽+1%丙基硫樣嘧啶),連續(xù)兩周,其余時間普通飼料喂養(yǎng)。兩周后隨機分為6組：高脂血癥組(HL)、高脂血癥合并SAP組(HAP)、羅格列酮干預組(HRP)、羅格列酮拮抗組(HRGP)、羅格列酮對照組(HR)、拮抗劑對照組(HG),每組20只。 實驗前動物禁食12h,自由飲水。HAP組造模同前,HRP組造模前1h腹腔注射ROSI(10mg/kg)再做SAP模型,HR組于造模前1h經(jīng)腹腔注射ROSI (10mg/kg); HRGP組于注射ROSI前30min經(jīng)腹腔注射GW9662(0.3mg/kg),余操作同HRP組,HG組僅于造模前30min經(jīng)腹腔注射GW9662(0.3mg/kg),HL組開腹僅翻動十二指腸若干次即可,其余組無特殊處理；HRP組和HRGP組常規(guī)麻醉、消毒、開腹,逆行膽胰管注射�；悄懰徕c法制作SAD模型。12h后取材,觀察大鼠胰腺、肺臟病理學變化。檢測肺組織濕/干比、血清AMY、TG、TC, Western Blot法檢測肺組織TNF-a和ICAM-1,免疫組化法檢測肺組織NF-κBp65。 結果：HL組和HAP組的TG、TC的血清水平較高,與比較HR組和HRP組具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；HAP組、HRGP組大鼠AMY、肺濕/干比、肺組織病理學評分以及NF-κBp65、TNF-α、ICAM-1表達水平均較HL組、HR組及HG組高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05); HRP組的大鼠肺臟病理學評分、肺濕/干比(W/D)、肺組織NF-κBp6、TNF-a、ICAM1表達水平相比于HAP組和HRGP組均有所降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),而HRGP組各項指標均與HAP組無明顯差異(P0.05)；對比HL、HR及HG三組,實驗檢測各項指標不具有差異性(P0.05)。 結論：羅格列酮可以對HAP大鼠的肺損傷起到一定的保護作用,其機制可能是通過降低血脂從而抑制肺組織內(nèi)NF-κB表達,從而減少下游的炎癥因子(如TNF-a和ICAM-1)的釋放,進而對HAP大鼠肺損傷起到一定保護作用。
[Abstract]:Part I : Establishment and evaluation of rat model of hyperlipidemia complicated with severe acute pancreatitis

Objective : To explore and establish a model of severe acute pancreatitis in rats with hyperlipidemia .

Methods : Forty SPF male SD rats were randomly divided into two groups : normal diet group and high fat diet group .
The high - fat diet group was also divided into high - fat pseudo - operation group ( HL group ) and hyperlipidemia - combined severe acute pancreatitis group ( group A ) .

Before the experiment , the rats were fasted for 12 h , and the rats were anesthetized , disinfected and opened , and the rats were injected with sodium cholate by the retrograde biliary pancreatic duct . The sham - operated group only reactionary the duodenum and the pancreas . After 12 h , the materials were taken to measure the pathological score of AMY , TC , TG and pancreas .

Results : The serum levels of TG and TC were significantly higher in the HL group than in the SO group and in the SAP group ( P0.05 ) .
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本文編號：2056394