本文選題：促紅細(xì)胞生成素 + 創(chuàng)傷性腦損傷��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：研究目的：炎癥在創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)的病理過程中促進(jìn)繼發(fā)性腦損傷的發(fā)展,導(dǎo)致腦水腫的形成、局部腦組織的壞死、神經(jīng)元的凋亡和神經(jīng)功能的缺失。據(jù)相關(guān)報道,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)是一類具有下調(diào)過度炎癥反應(yīng)能力的淋巴細(xì)胞亞群。因此,有理由認(rèn)為TBI后通過外源性干預(yù)(如給予一定劑量重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)等)增加體內(nèi)Tregs的水平可能有利于減少創(chuàng)傷后過度炎癥反應(yīng)所致的繼發(fā)性腦水腫、神經(jīng)元的凋亡和局部腦組織的壞死,從而減輕由TBI所致的空間學(xué)習(xí)記憶等神經(jīng)功能障礙。這將為TBI治療提供參考。 研究方法：選用成年健康清潔級雄性C57BL/6小鼠,按照隨機(jī)化原則分為假手術(shù)(sham)組、腦創(chuàng)傷后重組人促紅細(xì)胞生成素(TBI+rhEPO)組和生理鹽水(saline)(TBI+saline)組。分組后建立小鼠液壓打擊腦創(chuàng)傷模型。rhEPO于模型制作成功后1小時經(jīng)腹腔注射。腦創(chuàng)傷小鼠于傷后24小時和傷后72小時處死。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)染色方法分別觀察各組實驗小鼠的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在腦創(chuàng)傷后第24、72小時在外周脾臟和腦組織的變化情況。通過Morris水迷宮于各組小鼠傷后第7--12天進(jìn)行認(rèn)知功能評價。應(yīng)用干濕重法檢測各組小鼠傷后腦組織水腫情況。通過HE染色方法評估各組腦損傷小鼠傷后24和72小時腦組織壞死體積。酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定各組小鼠腦組織中細(xì)胞因子IL-10、 TGF-p、 IL-1β和TNF-a變化情況。最后應(yīng)用免疫組織化學(xué)／免疫熒光方法檢測各組小鼠腦組織中MPO+細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞、cleave caspase-3+及小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況。 研究結(jié)果：小鼠體內(nèi)Tregs的水平在腦創(chuàng)傷后24小時各組之間比較無差異。小鼠腦創(chuàng)傷后72小時,與sham組相比,TBI+saline組中外周脾臟中Tregs的數(shù)量明顯減少(P0.05)；與TBI+saline組相比,TBI+rhEPO組中Tregs的數(shù)量增多(P0.05)。在觀察腦組織中Tregs的浸潤情況發(fā)現(xiàn)：與sham組相比較,傷后72小時TBI+saline組的Tregs明顯增多(P0.05)；與TBI+saline組相比較,TBI+rhEPO組中Tregs的數(shù)量增多(P0.05)。干濕重法觀察發(fā)現(xiàn)：在傷后24和72小時,與sham組相比, TBI+saline組腦水含量增加明顯(P0.05)；與TBI+saline組相比較,TBI+rhEPO組腦組織的水含量明顯減少(P0.05)。對小鼠腦損傷后壞死體積檢測：傷后72小時,TBI+rhEPO組小鼠腦壞死體積較TBI+saline組小鼠明顯減少(P0.05)。腦創(chuàng)傷后,TBI+saline組小鼠在訓(xùn)練第二天后逃避潛伏期開始明顯長于sham組(P0.05)；而TBI+rhEPO與TBI+saline組相比, TBI+rhEPO組在訓(xùn)練第二天逃避潛伏期開始短于TBI+saline組(P0.05)。觀察腦組織中的炎癥細(xì)胞發(fā)現(xiàn)：傷后72小時,TBI+rhEPO組腦組織中激活的小膠質(zhì)細(xì)胞及CD3陽性細(xì)胞的浸潤均較TBI+saline組減少(P0.05)；而中性粒細(xì)胞則在傷后24小時浸潤增多,持續(xù)到傷后72小時,但呈下降趨勢,TBI+rhEPO組較TBI+saline組減少(P0.05)。應(yīng)用ELISA檢測技術(shù)觀察創(chuàng)傷側(cè)的促炎細(xì)胞因子(IL-1β、 TNF-a)和抗炎細(xì)胞因子(IL-10、TGF-β)的濃度時發(fā)現(xiàn)：在傷后24小時和72小時,TBI+rhEPO組中IL-10和TGF-p的表達(dá)水平均較TBI+saline組增高(P0.05)；而IL-1p和TNF-a的表達(dá)在TBI+rhEPO組中卻降低(P0.05)。觀察小鼠腦創(chuàng)傷后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況發(fā)現(xiàn)：與sham組相比,TBI+saline組中神經(jīng)元凋亡在第72小時增多(P0.05)；與TBI+saline組相比,TBI+rhEPO組腦創(chuàng)傷周圍明顯減少神經(jīng)元的凋亡(P0.05)。 研究結(jié)論：rhEPO治療小鼠腦創(chuàng)傷后增加體內(nèi)Tregs的水平能夠抑制TBI后發(fā)生的過度炎癥反應(yīng),從而減輕腦組織水腫,減少局部腦組織的壞死和神經(jīng)元凋亡,達(dá)到減輕TBI所致小鼠空間學(xué)習(xí)記憶等神經(jīng)功能障礙的目的。提示增加Tregs水平可能成為TBI治療的新途徑。
[Abstract]:The aim of this study is to promote the development of secondary brain injury during the pathological process of traumatic brain injury .

Methods : The changes of IL - 10 , TGF - p , IL - 1尾 and TNF - a in brain tissues of each group were assessed by using flow cytometry and immunohistochemical staining . The results showed that the levels of IL - 10 , TGF - p , IL - 1尾 and TNF - a in brain tissue of each group were assessed by using flow cytometry and immunohistochemical staining .

The results showed that there was no difference between the levels of TVB in the mice after brain trauma in mice after brain trauma . 72 hours after brain trauma in mice , the number of TVB in peripheral spleen decreased significantly ( P0.05 ) compared with sham group .
There was an increase in the number of Tcases ( P0.05 ) . In the observation of the infiltration of Trotonin in the brain tissue , the number of Tcases increased significantly in 72 hours after injury compared with the sham group ( P0.05 ) .
The results showed that the content of brain water increased significantly ( P0.05 ) compared with sham group after 24 and 72 hours after injury , compared with sham group .
Compared with the group , the water content of the brain tissue was significantly decreased ( P0.05 ) . After 72 hours after injury , the volume of brain necrosis was significantly decreased in mice after injury ( P0.05 ) . After the brain trauma , the mice after cerebral trauma could escape latency after training the second day significantly longer than sham group ( P0.05 ) ;
The inflammatory cells in the brain tissue were observed in 72 hours after injury , and the number of microglial cells and CD3 positive cells activated in the brain tissues of the TBCs + rhEPO group were decreased ( P0.05 ) .
The levels of IL - 1尾 , TNF - a and IL - 10 and TGF - 尾 were observed at 24 hours and 72 hours after injury .
The expression of IL - 1p and TNF - a decreased ( P0.05 ) .
The apoptosis of the neurons was significantly decreased around the brain trauma of the group ( P < 0.05 ) .

The results showed that rhEPO could inhibit the excessive inflammatory reaction in mice after cerebral trauma in mice , thereby reducing the edema of brain tissue , reducing the necrosis of local brain tissue and neuronal apoptosis .
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R651.15

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2039126