本文選題：炎癥 + 應(yīng)和�。� 參考：《南京大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：第一部分:緒論本部分重點(diǎn)介紹了論文相關(guān)的研究背景,包括創(chuàng)傷性顱腦損傷后的繼發(fā)性腦損傷發(fā)生機(jī)制;代謝性谷氨酸受體的基本類(lèi)型和藥理學(xué)研究進(jìn)展;mGluR5及其激動(dòng)劑CHPG在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中作用研究;葛根素的神經(jīng)保護(hù)作用及抗氧化應(yīng)激通路等。第二部分:大鼠創(chuàng)傷性顱腦損傷后代謝性谷氨酸受體5(mGluR5)的表達(dá)及細(xì)胞分布類(lèi)型背景與目的:創(chuàng)傷性顱腦損傷(TBI)后大量的谷氨酸被釋放,從而可以激活一系列的谷氨酸受體,其中包括代謝性谷氨酸受體5(mGluR5),進(jìn)一步發(fā)生相關(guān)的胞內(nèi)反應(yīng)。本研究旨在描述TBI后mGluR5蛋白及mRNA水平的時(shí)間表達(dá)情況,同時(shí)明確mGluR5在腦內(nèi)的細(xì)胞分布類(lèi)型。方法:采用改良的Feeney自由落體模型制作中度局灶性顱腦損傷模型(40g*15cm)。在傷后不同的時(shí)間點(diǎn)(0.5h,1h,6h,12h,24h,3d)留取傷灶周?chē)咏M織用于Western Blotting及RT-qPCR檢測(cè),在mGluR5蛋白水平表達(dá)高峰留取腦組織用于免疫組化及熒光雙染檢測(cè)。結(jié)果:(1)mGluR5蛋白水平在傷后明顯增加,傷后24h時(shí)達(dá)到高峰,在傷后3d mGluR5的表達(dá)仍較空白組明顯增高。(2)mGluR5mRNA水平在傷后呈現(xiàn)雙相改變,早期明顯升高(0.5h,1h,),后期則明顯降低(24h,3d)。(3)常規(guī)免疫組化及熒光雙染顯示TBI后傷灶周?chē)窠?jīng)元明顯丟失,小膠質(zhì)細(xì)胞活化,星形膠質(zhì)細(xì)胞纏結(jié),神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞均表達(dá)mGluR5。結(jié)論:創(chuàng)傷性顱腦損傷后,mGluR5無(wú)論是蛋白水平還是mRNA水平,時(shí)間或者空間上均發(fā)生改變,這些改變提示mGluR5可能參與了 TBI后的繼發(fā)性腦損傷及自身保護(hù)調(diào)節(jié)。第三部分:大鼠創(chuàng)傷性顱腦損傷后應(yīng)用mGluR5激動(dòng)劑CHPG對(duì)TBI誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響背景與目的:大量文獻(xiàn)已經(jīng)證實(shí)以小膠質(zhì)細(xì)胞為主導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是創(chuàng)傷性顱腦損傷后繼發(fā)性腦損傷的重要因素之一。體外研究發(fā)現(xiàn)mGluR5激動(dòng)劑CHPG可以抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化及其炎癥因子的釋放。本研究旨在探討mGluR5激動(dòng)劑CHPG能否通過(guò)減輕TBI后的炎癥反應(yīng)來(lái)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。方法:采用改良的Feeney自由落體模型制作中度局灶性顱腦損傷模型(40g*15cm)。TBI或者空白損傷30min后通過(guò)側(cè)腦室注射給予250nmol的CHPG或者溶劑。全部大鼠于傷后24小時(shí)處理,留取傷灶周?chē)訕?biāo)本,用于檢測(cè)腦水腫、Fluoro-Jade C染色、ED-1染色、炎癥因子含量(ELISA,RT-qPCR)。結(jié)果:(1)mGluR5激動(dòng)劑CHPG可以顯著減少TBI后傷灶周?chē)幽X水腫及神經(jīng)元退行性改變。(2)mGluR5激動(dòng)劑CHPG可以顯著減少TBI后傷灶周?chē)覧D-1的表達(dá)。(3)mGluR5激動(dòng)劑CHPG在蛋白及mRNA水平兩個(gè)方面均能顯著減少TBI后傷灶周?chē)酉嚓P(guān)炎癥因子(IL-1beta,IL-6,TNF-alpha)的表達(dá)。結(jié)論:創(chuàng)傷性顱腦損傷后,mGluR5激動(dòng)劑CHPG可以通過(guò)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化及其炎癥因子的釋放來(lái)減少傷灶周?chē)由窠?jīng)元的退變,從而發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用。第四部分:葛根素對(duì)大鼠創(chuàng)傷性顱腦損傷誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激性腦損傷的影響及其對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的作用背景與目的:相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)氧化應(yīng)激反應(yīng)是創(chuàng)傷性顱腦損傷后繼發(fā)性腦損傷的重要因素之一。近期,大量體內(nèi)及體外文獻(xiàn)均報(bào)導(dǎo)了葛根素能通過(guò)激活PI3K/Akt通路發(fā)揮其抗氧化應(yīng)激的作用。但關(guān)于葛根素在TBI中的作用尚屬未知。因此本研究主要探討了葛根素對(duì)TBI誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激性腦損傷的影響及可能的作用機(jī)制。方法:采用改良的Feeney自由落體模型制作中度局灶性顱腦損傷模型(40g*15cm)。TBI或者空白損傷10min前通過(guò)腹腔注射給予200mg/kg的葛根素或者溶劑。其中一個(gè)亞組在給予葛根素前通過(guò)側(cè)腦室注射給予PI3K/Akt通路抑制劑LY294002。全部大鼠于傷后24小時(shí)處理,留取傷灶周?chē)訕?biāo)本,用于檢測(cè)Phospho-Akt表達(dá),Fluoro-JadeC染色、氧化應(yīng)激標(biāo)志物(MDA,GSH,Na+-K+-ATPase活性,MPO活性)。結(jié)果:(1)葛根素能夠顯著減輕TBI后傷灶周?chē)由窠?jīng)元退行性改變。(2)葛根素能夠顯著升高GSH水平及Na+-K+-ATPase活性,降低MDA含量及MPO活性。(3)葛根素能夠明顯增強(qiáng)phospho-Akt的表達(dá),同時(shí)給予PI3K/Akt通路抑制劑LY294002后葛根素的保護(hù)作用被明顯減弱。結(jié)論:創(chuàng)傷性顱腦損傷后,葛根素可以通過(guò)激活PI3K/Akt通路,進(jìn)而發(fā)揮其抗氧化應(yīng)激作用,最終能夠減少傷灶周?chē)由窠?jīng)元的退變,從而發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用。
[Abstract]:The first part: the introduction focuses on the research background of the paper, including the mechanism of secondary brain injury after traumatic brain injury, the basic types of the metabolic glutamate receptor and the progress of pharmacology, the study on the role of mGluR5 and its agonist CHPG in Neuroglia; the neuroprotective effect of puerarin and its resistance to Neuroglia The second part: the second part: the expression of glutamate receptor 5 (mGluR5) in the offspring of traumatic brain injury in rats and the background and objective of the type of cell distribution: a large number of glutamic acid is released after traumatic brain injury (TBI), which can activate a series of glutamate receptors, including the metabolic glutamate receptor 5 (mGluR5), and the following This study was designed to describe the time expression of mGluR5 protein and mRNA levels after TBI, and to identify the type of cellular distribution of mGluR5 in the brain. Methods: a modified Feeney free falling body model was used to make moderate focal brain injury model (40g*15cm). At different time points after injury (0.5h, 1H, 6h, 12h, 24h, 3D) The surrounding cortex of the wound was used for the detection of Western Blotting and RT-qPCR, and the peak of the expression of the mGluR5 protein was used for immunohistochemistry and fluorescence double staining. Results: (1) the level of mGluR5 protein increased obviously after injury, the peak of 24h after injury, and the expression of 3D mGluR5 after injury was still higher than that in the blank group. (2) mGluR5mR The level of NA was changed in two phases after injury (0.5h, 1H, 1H), and later obviously decreased (24h, 3D). (3) conventional immunohistochemistry and fluorescent double staining showed that the neurons around the injured area were obviously lost, the microglia activation, astrocyte tangles, the Shen Jing Yuan and glial cells all expressed mGluR5. conclusion: traumatic brain injury, mGl UR5, whether it is protein level or mRNA level, changes in time or space, these changes suggest that mGluR5 may be involved in secondary brain injury and self-protection regulation after TBI. Third part: the background and purpose of the effect of mGluR5 agonist CHPG on TBI induced inflammatory response after traumatic brain injury in rats: a large number of literature It has been confirmed that the microglia led inflammatory response is one of the important factors for secondary brain damage after traumatic brain injury. In vitro studies have found that mGluR5 agonist CHPG can inhibit the activation of microglia and the release of inflammatory factors. The purpose of this study was to explore whether mGluR5 agonist CHPG could reduce inflammation after TBI. Methods: the modified Feeney free falling body model was used to make the moderate focal brain injury model (40g*15cm).TBI or the blank injury 30min after the injection of CHPG or solvent to 250nmol by injection of the lateral ventricle. All rats were treated at 24 hours after injury and left the surrounding cortex specimens of the wound, for the detection of brain edema. Fluoro-Jade C staining, ED-1 staining, and inflammatory factor content (ELISA, RT-qPCR). Results: (1) mGluR5 agonist CHPG can significantly reduce the cerebral edema and neuronal degeneration around the injured focal lesion after TBI. (2) mGluR5 agonist CHPG can significantly reduce the expression of ED-1 in the cortex around the injured focal lesion. (3) the agonist is at the protein and the level of two Conclusion: after traumatic brain injury, the mGluR5 agonist CHPG can reduce the activation of microglia and the release of inflammatory factors to reduce the degeneration of the peripheral cortical neurons in the wound, thus exerting its neuroprotection after traumatic brain injury. Conclusion: after traumatic brain injury, the mGluR5 agonist CHPG can reduce the degeneration of the periteno cortical neurons in the wound. The fourth part: the fourth part: the effect of Puerarin on oxidative stress brain injury induced by traumatic brain injury in rats and the background and purpose of its effect on the PI3K/Akt signaling pathway: the related study has confirmed that the oxidative stress reaction is one of the important factors of secondary brain injury after traumatic brain injury. The effect of Puerarin on antioxidant stress by activating PI3K/Akt pathway is reported. However, the role of Puerarin in TBI is unknown. Therefore, this study mainly discussed the effect and possible mechanism of Puerarin on TBI induced oxidative stress brain injury. Methods: a modified Feeney free falling body model was used. The moderate focal craniocerebral injury model (40g*15cm).TBI or blank injury before 10min was injected into the puerarin or solvent given to 200mg/kg by intraperitoneal injection. One of the subgroups was given the PI3K/Akt pathway inhibitor LY294002. in the lateral ventricle before granting puerarin, and all the rats were treated 24 hours after the injury, and the surrounding cortex specimens were left for the injury. Phospho-Akt expression, Fluoro-JadeC staining, oxidative stress markers (MDA, GSH, Na+-K+-ATPase activity, MPO activity). Results: (1) puerarin can significantly reduce the degeneration of peripheral cortical neurons after TBI injury. (2) puerarin can significantly increase the level of GSH water level and Na+-K+-ATPase activity, reduce MDA content and MPO activity. (3) puerarin The expression of phospho-Akt was obviously enhanced and the protective effect of Puerarin was obviously weakened after the PI3K/Akt pathway inhibitor LY294002. Conclusion: after traumatic brain injury, puerarin can activate the PI3K/Akt pathway and then exert its antioxidation stress. The protective effect of the nerve.
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R651.15

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本文編號(hào)：1961498