本文選題：細胞黏附分子類 + P選擇素��； 參考：《南方醫(yī)科大學學報》2016年03期

【摘要】：目的構建人細胞表面黏附分子P選擇素(p-selectin)基因啟動子熒光素酶報告基因載體pGL3-pselectin-promoter,檢測其轉錄活性,并應用于篩選藥物對其轉錄活性的影響。方法根據(jù)UCSC軟件查找的人基因組DNA的p-selectin啟動子序列并設計兩端引物,擴增人基因組DNA中的p-selectin啟動子。用限制性內切酶KpnⅠ和XhoⅠ雙酶切質粒pGL3-Basic和p-selectin啟動子后,將p-selectin基因啟動子插入到pGL3-basic報告基因載體上。重組質粒命名為pGL3-pselectin-promoter。將其與內參質粒p RL-SV40瞬時共轉染293F細胞,檢測雙熒光素酶活性。對不同啟動子片段長度的p-selectin報告基因進行雙熒光素酶的檢測。以炎癥因子和藥物分組刺激轉染了報告基因質粒的293F細胞并檢測雙熒光素酶活性。結果成功構建p-selectin基因啟動子熒光素酶報告基因載體pGL3-pselectin-promoter,質粒酶切及測序結果完全正確。瞬時共轉染pGL3-pselectin-promoter/p RL-SV40組熒光素酶活性為0.8573±0.4703,高于轉染pGL3-Basic/p RL-SV40組的熒光素酶活性值0.03955±0.05894。pGL3-1826 bp相比較于pGL3-1092 bp組和pGL3-3738 bp組具有最強的轉錄活性。炎癥因子LPS和TNF-α和藥物As2O3均具有上調pGL3-pselectin-promoter轉錄活性的作用。結論 pGL3-pselectin-promoter在293F細胞中能被轉錄激活,并驗證了炎癥因子對其轉錄表達的作用,并為藥物篩選與評價提供解決方案。
[Abstract]:Objective to construct a human cell surface adhesion molecule P selectin (P-selectin) promoter luciferase reporter gene vector pGL3-pselectin-promoter, to detect its transcriptional activity, and to screen the effect of the drug on its transcriptional activity. Methods the P-selectin promoter sequence of human genome DNA was searched according to the UCSC software and the two primers were designed. The P-selectin promoter in the human genome DNA was amplified. The P-selectin gene promoter was inserted into the pGL3-basic reporter gene carrier with the restrictive endonuclease Kpn I and Xho I double enzyme pGL3-Basic and P-selectin promoter, and the recombinant plasmid was named pGL3-pselectin-promoter. to co transfect 293F with the P RL-SV40 of the internal reference plasmid. The activity of double luciferase was detected. The P-selectin reporter gene of different promoter fragments was detected by double luciferase. 293F cells of the reporter gene plasmid were transfected with inflammatory factors and drug groups, and the activity of double luciferase was detected. The results successfully constructed the P-selectin gene promoter luciferase reporter gene. The results of plasmid digestion and sequencing were completely correct. The luciferase activity of the transient co transfected pGL3-pselectin-promoter/p RL-SV40 group was 0.8573 + 0.4703, which was higher than that of the transfected pGL3-Basic/p RL-SV40 group and the luciferase activity of 0.03955 + 0.05894.pGL3-1826 BP in the pGL3-1092 BP group and pGL3-3738 BP group. Transcriptional activity. Both inflammatory factors LPS and TNF- alpha and drug As2O3 all have the role of up regulation of pGL3-pselectin-promoter transcriptional activity. Conclusion pGL3-pselectin-promoter can be transcriptional activated in 293F cells, and the effect of inflammatory factors on its transcriptional expression is verified, and the solution for screening and evaluation of drugs is provided.

【作者單位】： 南方醫(yī)科大學病理生理學教研室//廣東省醫(yī)學休克微循環(huán)重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(81272095) 大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201512121268)~~
【分類號】：R459.7

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