本文選題：細(xì)胞黏附分子類 + P選擇素�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2016年03期

【摘要】：目的構(gòu)建人細(xì)胞表面黏附分子P選擇素(p-selectin)基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-pselectin-promoter,檢測(cè)其轉(zhuǎn)錄活性,并應(yīng)用于篩選藥物對(duì)其轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法根據(jù)UCSC軟件查找的人基因組DNA的p-selectin啟動(dòng)子序列并設(shè)計(jì)兩端引物,擴(kuò)增人基因組DNA中的p-selectin啟動(dòng)子。用限制性內(nèi)切酶KpnⅠ和XhoⅠ雙酶切質(zhì)粒pGL3-Basic和p-selectin啟動(dòng)子后,將p-selectin基因啟動(dòng)子插入到pGL3-basic報(bào)告基因載體上。重組質(zhì)粒命名為pGL3-pselectin-promoter。將其與內(nèi)參質(zhì)粒p RL-SV40瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染293F細(xì)胞,檢測(cè)雙熒光素酶活性。對(duì)不同啟動(dòng)子片段長(zhǎng)度的p-selectin報(bào)告基因進(jìn)行雙熒光素酶的檢測(cè)。以炎癥因子和藥物分組刺激轉(zhuǎn)染了報(bào)告基因質(zhì)粒的293F細(xì)胞并檢測(cè)雙熒光素酶活性。結(jié)果成功構(gòu)建p-selectin基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-pselectin-promoter,質(zhì)粒酶切及測(cè)序結(jié)果完全正確。瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染pGL3-pselectin-promoter/p RL-SV40組熒光素酶活性為0.8573±0.4703,高于轉(zhuǎn)染pGL3-Basic/p RL-SV40組的熒光素酶活性值0.03955±0.05894。pGL3-1826 bp相比較于pGL3-1092 bp組和pGL3-3738 bp組具有最強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄活性。炎癥因子LPS和TNF-α和藥物As2O3均具有上調(diào)pGL3-pselectin-promoter轉(zhuǎn)錄活性的作用。結(jié)論 pGL3-pselectin-promoter在293F細(xì)胞中能被轉(zhuǎn)錄激活,并驗(yàn)證了炎癥因子對(duì)其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的作用,并為藥物篩選與評(píng)價(jià)提供解決方案。
[Abstract]:Objective to construct a human cell surface adhesion molecule P selectin (P-selectin) promoter luciferase reporter gene vector pGL3-pselectin-promoter, to detect its transcriptional activity, and to screen the effect of the drug on its transcriptional activity. Methods the P-selectin promoter sequence of human genome DNA was searched according to the UCSC software and the two primers were designed. The P-selectin promoter in the human genome DNA was amplified. The P-selectin gene promoter was inserted into the pGL3-basic reporter gene carrier with the restrictive endonuclease Kpn I and Xho I double enzyme pGL3-Basic and P-selectin promoter, and the recombinant plasmid was named pGL3-pselectin-promoter. to co transfect 293F with the P RL-SV40 of the internal reference plasmid. The activity of double luciferase was detected. The P-selectin reporter gene of different promoter fragments was detected by double luciferase. 293F cells of the reporter gene plasmid were transfected with inflammatory factors and drug groups, and the activity of double luciferase was detected. The results successfully constructed the P-selectin gene promoter luciferase reporter gene. The results of plasmid digestion and sequencing were completely correct. The luciferase activity of the transient co transfected pGL3-pselectin-promoter/p RL-SV40 group was 0.8573 + 0.4703, which was higher than that of the transfected pGL3-Basic/p RL-SV40 group and the luciferase activity of 0.03955 + 0.05894.pGL3-1826 BP in the pGL3-1092 BP group and pGL3-3738 BP group. Transcriptional activity. Both inflammatory factors LPS and TNF- alpha and drug As2O3 all have the role of up regulation of pGL3-pselectin-promoter transcriptional activity. Conclusion pGL3-pselectin-promoter can be transcriptional activated in 293F cells, and the effect of inflammatory factors on its transcriptional expression is verified, and the solution for screening and evaluation of drugs is provided.

【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室//廣東省醫(yī)學(xué)休克微循環(huán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81272095) 大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201512121268)~~
【分類號(hào)】：R459.7

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本文編號(hào)：1889292