本文選題：SecinH3 + 小鼠�。� 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：研究背景 急性肺損傷是常見于ICU的臨床綜合征,并導(dǎo)致較高的死亡率。它常常發(fā)生在sepsis患者中。在膿毒癥導(dǎo)致的急性肺損傷的發(fā)病過(guò)程中,微血管滲漏,以及肺水腫,能夠加重疾病的嚴(yán)重程度。在這個(gè)過(guò)程中,一個(gè)顯著的特征是血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障的破壞,通透性增高。 內(nèi)皮細(xì)胞之間的緊密連接和細(xì)胞粘附在內(nèi)皮屏障中起著重要的作用,很多研究者針對(duì)細(xì)胞連接,發(fā)現(xiàn)了很多重要的信號(hào)通路,以及改善通透性的藥物,但是在嚴(yán)重的肺損傷中,不僅是細(xì)胞連接遭到破壞,內(nèi)皮細(xì)胞本身的損傷或者凋亡也會(huì)導(dǎo)致通透性增加。因此保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受損傷,是降低通透性的一項(xiàng)基礎(chǔ)的手段。 一種cytohesin Arf-GEFs的抑制劑,secinH3,通過(guò)阻斷Arf6的激活,從而增強(qiáng)了細(xì)胞之間的連接。但是SecinH3對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞是否有保護(hù)作用,則沒有文獻(xiàn)報(bào)道,因此,在本文中,我們?cè)谛∈竽摱景Y導(dǎo)致肺損傷的模型中,應(yīng)用cytohesion的抑制劑,secinH3,來(lái)治療膿毒癥導(dǎo)致的肺損傷,觀察他是否對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用,以及它對(duì)血管通透性以及肺損傷的影響。 研究方法 小鼠分成2組,假手術(shù)組和CLP組,研究CLP導(dǎo)致的膿毒癥對(duì)肺的影響,以確定CLP導(dǎo)致肺損傷的模型的效果。觀察小鼠的一般情況,血?dú)夥治?肺的順應(yīng)性,以及肺的病理切片,和死亡率。 2小鼠隨機(jī)分成4組：假手術(shù)組,CLP組,SecinH3低劑量組,SecinH3高劑量組。以確定SecinH3是否能降低通透性,減輕肺水腫。觀察制表位：小鼠血?dú)夥治?肺的順應(yīng)性,以及肺的病理切片,和死亡率。蛋白,細(xì)胞,水分的泄露的情況。以及肺內(nèi)的促炎因子的水平。 3.上述四個(gè)組在術(shù)后24小時(shí)取材后檢測(cè)肺臟的內(nèi)皮細(xì)胞的狀態(tài),透射電鏡和血液中vWF的水平。超氧化物歧化酶,丙二醛等氧化應(yīng)激的指標(biāo),同時(shí)檢測(cè)Nrf-2的表達(dá)。在體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,用LPS作為損傷因素,研究SecinH3對(duì)LPS處理的內(nèi)皮細(xì)胞的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡。并且在體內(nèi)和體外研究用SOD的抑制劑DDC研究SecinH3的作用。 結(jié)果 1.CLP術(shù)后,小鼠的呼吸功能,肺的順應(yīng)性大幅惡化。死亡率大幅增加,肺的HE染色顯示,CLP術(shù)后,小鼠的肺內(nèi)病理?yè)p傷嚴(yán)重,肺泡腔內(nèi)滲出大量的細(xì)胞。肺泡間隔增寬。 2.在CLP導(dǎo)致的肺損傷模型中,SecinH3可以提高了術(shù)后小鼠的肺呼吸功能,小鼠的血?dú)夂晚槕?yīng)性都得到改善,并且肺的病理切片也得到了改善。肺的白細(xì)胞,全細(xì)胞滲出,以及濕干比。促炎因子的檢測(cè)表明：肺內(nèi)的TNF和IL-6沒有下降。 3.在術(shù)后肺的電鏡顯示：小鼠肺臟的內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮細(xì)胞在CLP術(shù)后,腫脹嚴(yán)重。但是SecinH3可以改善內(nèi)皮細(xì)胞的腫,保護(hù)內(nèi)皮屏障。在SecinH3使用后,血液中vWF的水平也出現(xiàn)大幅下降。進(jìn)一步的研究表明,SecinH3可以增加SOD的活性,減輕MDA的量。減少了內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明：SecinH3是通過(guò)增強(qiáng)Nrf-2的表達(dá)從起到減輕氧化應(yīng)激的效果,Nrf-2是抗氧化中的重要的因子。SOD的抑制劑DDC的實(shí)驗(yàn)證明：DDC可以阻斷SecinH3的抗氧化作用。 結(jié)論 1.CLP模型可以導(dǎo)致急性肺損傷,該損傷模型對(duì)肺的大體功能和微觀病理都有較大的影響,是較好的肺損傷的模型。 2.SecinH3可以減輕急性肺損傷后的細(xì)胞滲出蛋白滲出以及肺水腫,降低肺的通透性。但是不能減低肺內(nèi)促炎因子的水平。 3.SecinH3通過(guò)調(diào)節(jié)Nrf-2的表達(dá),增加SOD的活性,減輕了氧化應(yīng)激,從而保護(hù)了內(nèi)皮細(xì)胞,減少了內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:Research background
Acute lung injury is a clinical syndrome common to ICU and leads to higher mortality. It often occurs in patients with sepsis. Microvascular leakage and pulmonary edema can aggravate the severity of the disease during the pathogenesis of acute lung injury caused by sepsis. In this process, a significant feature is the vascular endothelial cell barrier. The damage and permeability increase.
The close connections and cell adhesion between endothelial cells play an important role in the endothelial barrier. Many researchers have discovered many important signaling pathways and improved permeable drugs for cell connections, but in severe lung injuries, not only are cell connections damaged, endothelial cells themselves are damaged or apoptotic, too. It can lead to increased permeability. Therefore, protecting endothelial cells from injury is a basic means to reduce permeability.
An inhibitor of cytohesin Arf-GEFs, secinH3, enhances the connection between cells by blocking the activation of Arf6. But there is no literature on whether SecinH3 has protective effects on endothelial cells. Therefore, in this article, we used a cytohesion inhibitor, secinH3, in the model of lung injury caused by sepsis in mice. Sepsis induced lung injury, to observe whether he has a protective effect on endothelial cells, and its effect on vascular permeability and lung injury.
research method
The mice were divided into 2 groups, sham operation group and CLP group, to study the effect of sepsis on lung caused by CLP in order to determine the effect of CLP model on lung injury. Observe the general condition of the mice, blood gas analysis, lung compliance, lung pathological section, and mortality.
2 mice were randomly divided into 4 groups: the sham operation group, the CLP group, the SecinH3 low dose group, the high dose group of SecinH3, to determine whether SecinH3 could reduce the permeability and reduce the pulmonary edema. The observation of the surface position of the mice: the blood gas analysis, lung compliance, and the pathological section of the lung, and the mortality. Protein, cell, water leakage and the proinflammatory factors in the lung The level of the son.
3. the above four groups were selected 24 hours after the operation to detect the state of the endothelial cells in the lungs, transmission electron microscopy and the level of vWF in the blood. The indexes of oxidative stress such as superoxide dismutase, malondialdehyde and other oxidative stress were used to detect the expression of Nrf-2. Human umbilical vein endothelial cells were cultured in vitro, and LPS was used as a damage factor to study the endothelium of LPS treated by SecinH3 Cell apoptosis was detected by flow cytometry. In vivo and in vitro, SOD inhibitor DDC was used to study the role of SecinH3.
Result
After 1.CLP, the respiratory function and lung compliance of the mice were greatly deteriorated. The mortality rate increased significantly. The lung HE staining showed that after CLP, the pathological damage of lung in mice was serious and the alveolar cavity exuded a large number of cells. The alveolar septum was widened.
2. in CLP induced lung injury model, SecinH3 could improve lung respiratory function in mice after operation. The blood gas and compliance of mice were improved, and the lung pathological sections were also improved. Lung white blood cells, whole cell exudation, and wet dry ratio. The detection of pro-inflammatory factors showed that TNF and IL-6 in lung did not decline.
3. the electron microscope after the operation showed that the endothelial cells in the lungs of the mice were swollen seriously after CLP, but SecinH3 could improve the swelling of the endothelial cells and protect the endothelial barrier. After SecinH3, the level of vWF in the blood decreased significantly. Further studies showed that SecinH3 could increase the activity of SOD and reduce the amount of MDA. The apoptosis of endothelial cells was reduced. The immunoblotting experiment showed that SecinH3 was effective by enhancing the expression of Nrf-2 and alleviating oxidative stress. Nrf-2 was an important inhibitor of.SOD, the inhibitor of DDC, the experiment proved that DDC could block the antioxidant effect of SecinH3.
conclusion
The 1.CLP model can lead to acute lung injury. This damage model has a greater impact on the general function and microscopic pathology of the lung, and is a better model for lung injury.
2.SecinH3 can reduce exudation of the exudates and pulmonary edema after acute lung injury, and reduce the permeability of the lung. However, it can not reduce the level of proinflammatory factors in the lung.
3.SecinH3 can reduce the oxidative stress by regulating the expression of Nrf-2 and increasing the activity of SOD, thereby protecting the endothelial cells and reducing the apoptosis of endothelial cells.

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R459.7

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1796681