本文選題：失血性休克　切入點：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激　出處：《河北北方學(xué)院》2013年碩士論文

【摘要】：重癥失血性休克引起機體組織器官的缺血、缺氧,進一步引起組織細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress, ERS),導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)損傷或凋亡,成為患者器官功能障礙、衰竭乃至死亡的重要因素。近年來研究表明,危重狀態(tài)下的腸淋巴液回流至體循環(huán)成為遠隔器官肺、肝、心、腎等重要器官損傷的重要原因；以腸淋巴管結(jié)扎或腸淋巴液引流的手段阻斷腸淋巴液回流均可減輕各組織器官的炎癥反應(yīng)、自由基損傷,改善能量代謝,對于重癥休克的防治具有積極意義。但減少腸淋巴液回流減輕器官損傷的機制是否與降低組織細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān),尚不清楚。 為此,本研究采用失血性休克模型,觀察休克腸淋巴液引流對休克大鼠肺、肝、腎、心肌組織細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志分子葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein78, GRP78)、鈣網(wǎng)蛋白(calreticulin, CRT)的影響,進一步觀察對ERS引起細胞凋亡途徑的啟動分子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)、天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase12, Caspase-12)以及細胞凋亡的影響,探討腸淋巴液引流對失血性休克大鼠組織細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用。 首先,18只Wistar雄性大鼠隨機均分為：假手術(shù)組、休克組及休克腸淋巴液引流組(休克+引流組)。大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉全身麻醉后,行股部手術(shù),右股靜脈注射肝素鈉全身抗凝,右股動脈插管連接生物信號采集系統(tǒng),連續(xù)監(jiān)測平均動脈血壓(mean artery pressure, MAP);左股側(cè)動脈插管后連接注射器固定于抽注機上備放血用；腹部手術(shù),剝離腸系膜淋巴管。待所有手術(shù)完成、穩(wěn)定30min后,休克組、休克+引流組大鼠經(jīng)左股動脈勻速放血,10min內(nèi)將MAP降至40mmHg,復(fù)制失血性休克模型。維持低血壓60min后,將放出的全血與林格氏液按1：1混勻,經(jīng)右側(cè)股靜脈輸液復(fù)蘇,30mmin完成；觀察至輸液結(jié)束后3h。休克+引流組在輸液結(jié)束后,行腸淋巴管插管,按我室常規(guī)方法引流休克腸淋巴液至休克3h。假手術(shù)組進行相同的手術(shù)操作,但不放血、不輸液。休克組及休克+引流組大鼠在液體復(fù)蘇后3h、假手術(shù)組于相應(yīng)時間點,留取肺、肝、心肌、腎組織,部分組織制備10%組織勻漿,ELISA法檢測GRP78、CRT、CHOP、Caspase-12含量；部分組織制備單細胞懸液,應(yīng)用流式細胞儀進行細胞周期分析,計算細胞增殖指數(shù)(proliferation index, PI)；部分組織應(yīng)用多聚甲醛固定,制備組織切片,DAPI染色法檢測各組織細胞的凋亡率。 結(jié)果顯示,休克組大鼠肺、肝、腎、心肌組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志分子GRP78、CRT含量均顯著高于假手術(shù)組；休克+引流組肺、肝、腎、心肌組織GRP78含量以及肺、肝、腎組織CRT含量均顯著低于休克組,但肺、肝、心肌組織GRP78、CRT含量仍顯著高于假手術(shù)組。同時,發(fā)現(xiàn)休克組大鼠肺、肝、腎、心肌組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起細胞凋亡途徑啟動分子CHOP、Caspase-12含量均顯著高于假手術(shù)組；休克+引流組肺、肝、腎、心肌組織CHOP以及肝、腎組織Caspase-12含量均顯著低于休克組,但肺、肝、心肌組織CHOP以及肺、肝組織Caspase-12含量仍顯著高于假手術(shù)組。 進一步的研究發(fā)現(xiàn),休克組大鼠肝、腎組織的G0/G1期細胞顯著高于假手術(shù)組,肺、肝、腎組織S期細胞、G2/M期細胞、增殖指數(shù)PI均顯著低于假手術(shù)組,腸淋巴液引流則引起肺、肝、腎組織G0/G1期細胞顯著降低、PI顯著增高。同時也發(fā)現(xiàn),休克組大鼠肺、肝、腎、心肌組織細胞凋亡率明顯高于假手術(shù)組,腸淋巴液引流有效地減少了肺、肝、腎、心肌組織的細胞凋亡。 總之,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是失血性休克后肺、肝、腎、心肌損傷的重要發(fā)病學(xué)機制之一；腸淋巴液引流可減少失血性休克大鼠多個組織器官內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志分子GRP78、CRT的含量,進一步減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起細胞凋亡途徑啟動分子CHOP、Caspase-12的含量,從而改善細胞增殖,減少細胞凋亡。研究結(jié)果為以淋巴為靶點進一步應(yīng)用于危重病的臨床防治奠定了實驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:In recent years , it has been shown that the reflux of the intestinal lymph fluid into the circulatory system is an important cause of the injury of vital organs such as lung , liver , heart and kidney .
It is not clear whether the mechanism of reducing the reflux of intestinal lymph fluid to alleviate organ damage is related to the reduction of the endoplasmic reticulum stress of the tissue cells .

In this study , hemorrhagic shock model was used to observe the effects of shock intestinal lymph fluid drainage on the expression of glucose - regulated protein 78 ( GRP78 ) and calreticulin ( CRT ) in the lung , liver , kidney and myocardial tissue cells of shock rats .

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本文編號：1729111