本文選題：miR-146a　切入點：miR-193b*　出處：《中國人民解放軍醫(yī)學院》2013年碩士論文

【摘要】：目的：本實驗旨在應用實時熒光定量PCR技術篩選并驗證可用于診斷、預測膿毒癥預后的血清miRNA，并觀察血清miRNA在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的動態(tài)變化及與疾病的關系。 方法：以2011年9月10日至2012年12月30日期間在中國人民解放軍總醫(yī)院呼吸重癥監(jiān)護病房、急診重癥監(jiān)護病房和外科重癥監(jiān)護病房的住院患者為研究對象，收集滿足膿毒癥兩項或兩項以上條件感染患者的血標本，共66例。按照28天疾病轉歸情況，分為生存患者33例，死亡患者33例，并以24名健康人血清作為對照。采集第1、3、5、7、10、14天的血清樣本，并記錄對應時間的生命體征、CRP、PCT、血常規(guī)、血生化、凝血功能及動脈血氣分析結果。利用qRT-PCR驗證前期測序篩選出的差異表達miRNA分子，對有差異表達的miRNA進行ROC曲線分析，比較曲線下面積。最后將上述篩選出的miRNA和常用指標包括基礎疾病、WBC、CRP、APECHEⅡ評分和SOFA評分均納入二分類變量logistic回歸分析，篩選同膿毒癥預后相關的因素。對最終篩選的miRNAs進行靶基因預測，探討其參與膿毒癥發(fā)病的機制。 結果：選取同膿毒癥相關的7種miRNA(miR-16，miR-122，miR-146a，miR-150，，miR-193b*，miR-483-5p和miR-574-5p)進行qRT-PCR驗證。驗證后本研究的主要結果如下：1）66例膿毒癥患者與24例健康對照組在各個觀測時間點的組間比較，miR-483-5p和miR-574-5p差異無統(tǒng)計學意義（p0.05）, miR-16、miR-122、miR-146a、miR-150和miR-193b*的表達差異有統(tǒng)計學意義（p0.001）；2）66例膿毒癥患者中的33例生存組和33例死亡組比較， miR-193b*、miR-574-5p在各時間點上p值均小于0.001，miR-16在第1天（p=0.041）、miR-122在第1天（p=0.026）和第10天(p=0.040)，miR-483-5p在第1天(p=0.009)、第5天(p=0.014)第14天(p=0.042)差異有統(tǒng)計學意義，其余miRNAs在各時間點的組間比較差異無統(tǒng)計學意義（p0.05）；3）ROC曲線分析得到miR-146a在各個觀測時間點診斷膿毒癥的AUC最大（AUC90%），敏感性和特異性都較高；4）將生存組和死亡組存在差異表達的4種miRNA入組第1天的表達量水平同對應時間點的SOFA評分、APACHEⅡ評分、WBC和CRP做預測病死率的ROC受試曲線，結果顯示，miR-193b*的AUC最大為0.858(0.763,0.952)，其次是miR-574-5p和miR-483-5p，其AUC分別是0.711(0.573,0.850)和0.681(0.545,0.817)；5）利用二分類變量logistic回歸分析評價膿毒癥的危險因子與保護因子，結果顯示年齡、SOFA評分,miR-122、miR-193b*、miR-483-5p和miR-574-5p在評估膿毒癥預后方面有重要的價值（p0.05），但只有miR-193b*進入最后的回歸方程，OR是0.769(95%CI，0.667-0.887)，提示miR-193b*是膿毒癥預后獨立的危險因子；6）利用miRanda和targetscan這兩個靶基因數(shù)據(jù)庫對miR-193b*進行靶基因預測，共預測得到18個在兩個數(shù)據(jù)庫中有交集的靶基因，并通過KEGG數(shù)據(jù)庫對靶基因進行通路注釋，其中7個靶基因可能作用于膿毒癥的相關通路，為下一步的研究建立了良好的基礎。 結論：1.證實了miR-16、miR-122、miR-146a、miR-150在膿毒癥病程中表達穩(wěn)定，可作為診斷膿毒癥的生物標記物，其中miR-146a的診斷效果最好；2.MiR-193b*是一種可用于膿毒癥診斷的生物標記物，并可以用來評價膿毒癥的預后，是膿毒癥的獨立危險因子；3.經(jīng)預測，miR-193b*可調(diào)控18個靶基因，其中7個靶基因可能作用于膿毒癥的相關通路。
[Abstract]:Objective: the aim of this experiment is to screen and verify the serum miRNA that can be used for diagnosis and predict the prognosis of sepsis, and observe the dynamic changes of serum miRNA in the course of disease development and its relationship with disease by real-time fluorescence quantitative PCR.
Methods: from September 10, 2011 to December 30, 2012 in General Hospital of PLA respiratory intensive care ward, emergency ICU and surgical ICU hospitalized patients as the research object, collecting satisfied sepsis in two or two of the above conditions infection of blood specimens, a total of 66 cases. According to the 28 days of disease prognosis, divided into 33 cases the survival of patients, 33 patients died, and 24 healthy people as control group. Serum collected serum samples in 1,3,5,7,10,14 days, and record the corresponding time of vital signs, CRP, PCT, blood routine, blood biochemistry, blood coagulation function and arterial blood gas analysis results. The expression of miRNA between pre screened by qRT-PCR sequencing verification. The different expression of miRNA by ROC curve analysis, comparison of the area under the curve. Finally, the selected miRNA and common indicators including basic disease, WBC, CRP, APECH E II score and SOFA score were all included in the two categorical variable logistic regression analysis. The factors related to the prognosis of sepsis were screened. Target genes of the final screened miRNAs were predicted, and the mechanism of their involvement in the pathogenesis of sepsis was discussed.
Results: select the same 7 sepsis associated with miRNA (miR-16, miR-122, miR-146a, miR-150, miR-193b*, miR-483-5p and miR-574-5p) qRT-PCR verification. The main results of this study are as follows: 1) after verification of 66 cases of patients with sepsis and 24 healthy control group at each observation time point between the two groups miR-483-5p and miR-574-5p, there was no significant difference (P0.05), miR-16, miR-122, miR-146a, there was significant difference in the expression of miR-150 and miR-193b* (p0.001); 2) 66 cases of miR-193b* patients with sepsis in 33 cases of survival group and 33 cases of death group, miR-574-5p at each time point, P values were less than in 0.001, miR-16 in first days (p=0.041), miR-122 (p=0.026) in first days and tenth days (p=0.040), miR-483-5p (p=0.009) in first days, fifth days and fourteenth days (p=0.014) (p=0.042) the difference was statistically significant, no significant remaining miRNAs at each time point between group differences The significance (P0.05); 3) ROC miR-146a curve analysis in various time points in diagnosis of sepsis AUC (AUC90%), high sensitivity and specificity; 4) the survival group and death group, there are 4 miRNA in group first days the expression level of differentially expressed with corresponding time points SOFA score, APACHE score, WBC and CRP to predict mortality rate of ROC test results show that the miR-193b* curve, the maximum is 0.858 AUC (0.763,0.952), followed by miR-574-5p and miR-483-5p, the AUC were 0.711 (0.573,0.850) and 0.681 (0.545,0.817); 5) regression analysis of risk factors and protective factors of sepsis sepsis using two classification variables logistic, the results showed that age, SOFA score, miR-122, miR-193b*, miR-483-5p and miR-574-5p have important value in assessing the prognosis of sepsis (P0.05), but only miR-193b* into the final regression equation, OR is 0.769 (95%CI, 0.6 67-0.887), suggesting that miR-193b* is a risk factor for sepsis prognosis; 6) potential target genes of miR-193b* were predicted by miRanda and targetscan of the two target genes were predicted by the database, 18 of the two databases have target genes overlap, and the database by KEGG pathway annotation of target genes, including related pathways 7 target genes may play a role in sepsis, established a good foundation for the next research.
Conclusion: 1. confirmed miR-16, miR-122, miR-146a, miR-150 expression in sepsis patients, can be used as a biological marker for the diagnosis of sepsis, the diagnosis of miR-146a is the best; 2.MiR-193b* is a kind of biomarkers for the diagnosis of sepsis, and can be used to evaluate the prognosis of sepsis that is the independent risk factor of sepsis; 3. after the forecast, miR-193b* can regulate the expression of 18 target genes, 7 genes related to the pathway may play a role in sepsis.

【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R459.7

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本文編號：1717664