本文關(guān)鍵詞： MiRNA 表達(dá)譜 急性心梗 左心室輔助裝置(LVAD)　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景及目的心肌細(xì)胞因缺乏再生能力,遇到缺血缺氧等多種原因?qū)?dǎo)致心肌細(xì)胞損傷,造成心肌細(xì)胞丟失、纖維組織增生,引發(fā)心室重構(gòu),并逐漸進(jìn)展成心力衰竭。左心室循環(huán)輔助裝置(LVAD)已經(jīng)被證明是治療心力衰竭的有效手段,使用LVAD進(jìn)行機(jī)械循環(huán)支持可以通過(guò)對(duì)衰竭的左心室卸負(fù)荷的方式帶來(lái)有利的影響。然而,LVAD在急性心肌梗死治療的應(yīng)用還需進(jìn)一步研究論證,LVAD對(duì)AMI后期的預(yù)后及其機(jī)制有待進(jìn)一步闡明。微小RNA(miRNA,miRNA)是一種21-23個(gè)堿基組成的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA,可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。MiRNA參與多種病理生理學(xué)過(guò)程。目前miRNAs在心肌缺血中的功能與機(jī)制研究尚處于起步階段,尤其是有關(guān)心肌缺血早期miRNAs改變的報(bào)道較少。也沒(méi)有在AMI早期采取LVAD干預(yù)后,對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)部miRNA的分析,及其相關(guān)信號(hào)通路的研究。本文試圖在羊急性心梗模型上建立miRNA表達(dá)譜,為L(zhǎng)VAD治療急性心梗提供理論依據(jù)。研究方法1、成年小尾寒羊經(jīng)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈制作心梗模型,心臟不停跳植入FW-2型軸流泵,分別為對(duì)照組和卸負(fù)荷組。2、模型建立后,進(jìn)行心電圖檢測(cè),同時(shí)置入Swan-gaze漂浮導(dǎo)管進(jìn)行檢測(cè)記錄。3、72小時(shí)后,分別取對(duì)照組和卸負(fù)荷組的心肌組織,分為正常區(qū)域,梗死邊帶區(qū)域以及梗死區(qū)域,進(jìn)行組織染色法。4、TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞的凋亡情況。5、高通量測(cè)序技術(shù)建立miRNA表達(dá)譜。6、比較對(duì)照組和卸負(fù)荷組相應(yīng)區(qū)域心肌中差異表達(dá)的miRNA。7、PCR對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。8、驗(yàn)證后對(duì)差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行功能和信號(hào)通路分析。研究結(jié)果1、對(duì)照組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行7只,其中3只造模成功。LVAD組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共有5只,其中3只成功。2、HE染色結(jié)果顯示與對(duì)照組相比,卸負(fù)荷組心肌細(xì)胞破壞減弱,同時(shí)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少。Masson染色結(jié)果顯示卸負(fù)荷組膠原化面積減小,心肌細(xì)胞保留較多。天狼猩紅染色結(jié)果顯示卸負(fù)荷組膠原化明顯減輕;對(duì)比梗死區(qū)域,卸負(fù)荷后主要是Ⅲ型膠原,而對(duì)照組則主要是Ⅰ型膠原。3、TUNEL結(jié)果顯示心梗卸負(fù)荷后,心肌細(xì)胞凋亡明顯減弱。4、卸負(fù)荷組與對(duì)照組相比,心梗區(qū)域差異表達(dá)的miRNA是oar-miR-19b(上調(diào));梗死邊帶區(qū)域差異表達(dá)的miRNA有3個(gè),其中下調(diào)的是oar-miR41 1b-5p 和 oar-miR-487a-5p,上調(diào)的是 oar-miR-26a。5、PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示 oar-miR-19b(P0.05)和 oar-miR-26a(P0.01)在卸負(fù)荷組與對(duì)照組中表達(dá)有明顯差異,與芯片結(jié)果相符。6、GO和KEGG分析結(jié)果顯示oar-miR-19b和oar-miR-26a所涉及到的功能和信號(hào)通路均與心血管疾病有密切的關(guān)系。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)利用FW-2型軸流泵成功地對(duì)急性心梗的羊進(jìn)行了 3天的循環(huán)輔助,證實(shí)LVAD可有效減輕心梗程度。成功地建立了急性心梗和LVAD干預(yù)的miRNA表達(dá)譜,并進(jìn)行了驗(yàn)證,結(jié)果表明該表達(dá)譜可用于探索未知的miRNA,并研究它們參與急性心梗反應(yīng)的調(diào)控機(jī)理。
[Abstract]:Background and objective Myocardial cells, due to lack of regenerative ability, may lead to myocardial cell damage, myocardial cell loss, fibrous tissue proliferation and ventricular remodeling when they encounter ischemia and hypoxia. Left ventricular circulatory aids (LVAD) have been shown to be effective in the treatment of heart failure. Mechanical circulatory support with LVAD may have a beneficial effect on the left ventricular load relief from failure. However, the application of LVAD in the treatment of acute myocardial infarction needs further study to demonstrate its late prognosis and prognosis in patients with acute myocardial infarction. The mechanism of microRNAs miRNAs miRNAs is an endogenous non-coding single-stranded small RNAs composed of 21-23 bases, which can regulate the expression of genes at post-transcriptional level. MiRNAs are involved in many pathophysiological processes. At present, miRNAs is involved in myocardial ischemia. The study of function and mechanism in this paper is still in its infancy. In particular, there were few reports of miRNAs changes in the early stage of myocardial ischemia and no analysis of miRNA in cardiomyocytes after the early intervention of LVAD in the early stage of AMI. In order to provide theoretical basis for the treatment of acute myocardial infarction (AMI) with LVAD, this paper attempts to establish the expression profile of miRNA on the model of acute myocardial infarction. 1. Adult small tail Han sheep model of myocardial infarction was established by ligation of coronary artery. The heart was implanted with FW-2 type axial flow pump for control group and load relief group. After the model was established, electrocardiogram (ECG) was detected, and Swan-gaze floating catheter was inserted to record the results for 72 hours. The myocardial tissues of the control group and the load relief group were taken respectively after 72 hours. Divided into normal area, infarct side zone and infarct area, The apoptosis of cardiomyocytes was detected by tissue staining, Tunel method and high throughput sequencing technique. The expression profile of miRNA was established by high throughput sequencing. The results were verified by comparing the differentially expressed miRNA.7mRNAs in the corresponding regions of the control group and the unloading group. The functional and signal pathways of differentially expressed miRNA were analyzed. Among them, 3 rats were successfully made. LVAD group had 5 animals, among them, 3 rats were successfully stained with HE. The results of HE staining showed that the myocardial cell destruction in the unloading group was weaker than that in the control group. At the same time, the infiltration of inflammatory cells was significantly decreased. Masson staining showed that the area of collagen was decreased and the cardiac myocytes were retained more in the load relief group. The results of sirius red staining showed that the collagenization of the load relief group was significantly reduced. The results of Tunel showed that the apoptosis of myocardial cells was significantly decreased after load relief. The results showed that the apoptosis of cardiac myocytes in the unloaded group was significantly lower than that in the control group, and that in the unloaded group was significantly lower than that in the control group, and that in the unloaded group was significantly lower than that in the control group. The differential expression of miRNA in myocardial infarction region was oar-miR-19b (upregulation; infarct sideband region, miRNA was down-regulated by oar-miR41 1b-5p and oar-miR-487a-5p; Oar-miR-26a.5p was up-regulated; Oar-miR-19bP0.05) and oar-miR-26aP0.01 were significantly different between the unloading group and the control group. The results of .6go and KEGG analysis showed that the function and signal pathway involved in oar-miR-19b and oar-miR-26a were closely related to cardiovascular disease. Conclusion in this experiment, FW-2 type axial flow pump was successfully used to treat acute myocardial infarction in sheep. 3 days of circulatory assistance, It was proved that LVAD could effectively reduce the degree of myocardial infarction. The miRNA expression profiles of acute myocardial infarction and LVAD intervention were successfully established and verified. The results showed that the expression profile could be used to explore unknown miRNAs and to study the regulatory mechanism of their involvement in acute myocardial infarction response.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R542.22;R-332

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本文編號(hào)：1553539