本文關(guān)鍵詞：高表達(dá)VCAM-1對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞體外遷移特性的影響

  更多相關(guān)文章： 血管細(xì)胞粘附分子1 間充質(zhì)干細(xì)胞 體外遷移 MAPK通路

【摘要】：目的：利用本實(shí)驗(yàn)室前期獲得的穩(wěn)定過表達(dá)血管細(xì)胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSC)作為研究對(duì)象,研究VCAM-1基因在MSC中過表達(dá)對(duì)其形態(tài)、生長特性及體外定向移動(dòng)等特性的作用,為優(yōu)化MSC臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法：將基因修飾高表達(dá)VCAM-1的小鼠MSC(C2H10T1/2-VCAM-1)、轉(zhuǎn)染空載體的小鼠MSC(C3H10 T1/2-MIGR1)和正常小鼠MSC(C3H10 T1/2)三種細(xì)胞分別接種在6孔板中,采用姬姆薩染色的方法研究各組細(xì)胞外形特點(diǎn)的變化；將C2H10T1/2-VCAM-1、C3H10T1/2-MIGR1和C3H10 T1/2三種細(xì)胞分別接種于48孔板中,采用CCK8方法監(jiān)測三種細(xì)胞在多個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)的光密度值,探究過表達(dá)VCAM-1對(duì)MSC生長特性的影響；分別提取C2H10T1/2-VCAM-1、 C3H10T1/2-MIGR1和C3H10T1/2三種細(xì)胞胞漿蛋白,BCA法測量蛋白濃度,采用蛋白質(zhì)印跡法研究過表達(dá)VCAM-1對(duì)MAPK(p38/MAPK、ERK/MAPK及JNK/MAPK)信號(hào)通路的影響作用,采用transwell培養(yǎng)體系,將C2H10T1 /2-VCAM-1、C3H10T1 /2-MIGR1)和C3H10T1/2分別接種在孔徑為8 μm的transwell培養(yǎng)板上面,取優(yōu)質(zhì)FBS為趨化物誘導(dǎo)MSC移動(dòng)。待細(xì)胞移動(dòng)8小時(shí)和12小時(shí)之后,采用結(jié)晶紫和DAPI對(duì)transwell培養(yǎng)半透膜下的MSC進(jìn)行染色,而后計(jì)量每組MS C的遷移細(xì)胞數(shù)目并計(jì)算遷移效率。深入實(shí)驗(yàn),將MAPK信號(hào)通路的阻斷劑(SB203580, PD98059和JNK inhibitor Ⅱ)混入進(jìn)trans well培養(yǎng)體系內(nèi),記錄各組MSC移動(dòng)能力的變化。結(jié)果：VCAM-1基因轉(zhuǎn)染后,MSC形態(tài)無顯著改變。過表達(dá)VCAM-1的MSC相比MSC和轉(zhuǎn)染空載體的MSC,生長速度最慢,存活細(xì)胞數(shù)目最少。經(jīng)過8h和12h的transwell體系培養(yǎng),轉(zhuǎn)染高表達(dá)VCAM-1的C2H10T1/2-VCAM-1遷移的細(xì)胞數(shù)(7467±485,8795±255)和遷移率(14.9%±1%,17.6%±0.5%)均顯著高于正常組C3H10T1/2(2731±562,4779±224；5.5%±1.1%,9.6%±0.4%)和轉(zhuǎn)染空載體組C3H10T1/2-MIGR1 (2539±321,5645±1080；5.1%±0.6%,11.3% ±1.1%)(P0.05),且正常組和轉(zhuǎn)染空載體組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；加入JNK/MAPK通路抑制劑JNK inhibitor Ⅱ可顯著抑制VCAM-1對(duì)MSC的促遷移作用,遷移的MSC細(xì)胞數(shù)(4843±167)和遷移率(9.7%±0.3%)均較其它兩組顯著降低(P0.05)。但p38/MAPK信號(hào)通路的阻斷劑SB203580及ERK/MAPK信號(hào)通路的阻斷劑PD98059則對(duì)高表達(dá)VCAM-1的MSC移動(dòng)能力無顯著改變(P0.05)。結(jié)論:VCAM-1基因轉(zhuǎn)染與否,對(duì)MSC能否維持原有的形態(tài)不會(huì)有影響。過表達(dá)VCAM-1的MSC相比C3H10T1/2-MIGR1和C3H10T1/2,增殖速度最慢,過表達(dá)VCAM-1會(huì)抑制MSC的生長。高表達(dá)VCAM-1會(huì)促進(jìn)小鼠MSC的體外遷移,這可能與JNK/MAPK通路的改變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：血管細(xì)胞粘附分子1 間充質(zhì)干細(xì)胞 體外遷移 MAPK通路
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-7
• 縮略詞表7-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-41
• 相關(guān)綜述41-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 碩士期間發(fā)表論文49

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本文編號(hào)：979608