本文關(guān)鍵詞：優(yōu)化宿主菌在重組系統(tǒng)中構(gòu)建大容量天然噬菌體抗體庫

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【摘要】：制備大容量天然噬菌體抗體庫。從健康成人外周血和新生兒臍帶血中提取淋巴細(xì)胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄后PCR分別擴(kuò)增抗體重鏈和輕鏈基因。將獲得的基因片段通過overlap PCR連接為單鏈抗體基因(scFv),限制性內(nèi)切酶酶切后連入pDAN5a載體中,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL2-blue MRF’。與XL1-blue菌株相比,初級庫庫容增加了3.9倍。再將初級庫噬菌體感染含有Cre重組酶的大腸桿菌BS1365,抗體基因在重組酶作用下發(fā)生同源重組,最終得到庫容為1.7×1011的噬菌體抗體庫。經(jīng)檢測,該抗體庫多樣性良好,利用該庫可獲得針對6種抗原的抗體。以上結(jié)果表明,應(yīng)用XL2-blue MRF’作為抗體基因的轉(zhuǎn)化宿主,提高了噬菌體抗體庫的庫容,獲得的抗體庫可用于下一步抗體藥物的篩選。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 噬菌體展示 抗體庫 重組系統(tǒng) 宿主菌
【基金】：科技部國際合作項目(2010DFB32900) 國家自然科學(xué)基金重點項目(81030056) 教育部“長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊發(fā)展計劃”創(chuàng)新團(tuán)隊(IRT1007) 博士點基金(20111106110030)
【分類號】：R392
【正文快照】： 20世紀(jì)90年代中期以來,抗體藥物在新藥中嶄露頭角。經(jīng)過近20年的發(fā)展,治療性單克隆抗體藥物已經(jīng)成為重要的臨床藥品種類,并在腫瘤、自身免疫性疾病、移植排斥疾病等的治療中發(fā)揮著傳統(tǒng)藥物不可替代的作用[1]。制備抗體藥物主要通過人源化(humanized)及全人源(fully human)技

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李曉軍;;人源性抗體庫技術(shù)及其應(yīng)用前景[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2006年11期

2 王桂云,朱筱娟,王麗;噬菌體展示外源多肽的免疫原性研究[J];東北師大學(xué)報(自然科學(xué)版);2001年03期

3 張建瓊,魏華,魯曉萱,鮑海遜,孟繼鴻,謝維;人源抗戊型肝炎病毒單克隆抗體的獲得與鑒定[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2004年03期

4 沈毅s，

本文編號：957312