本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲蟲卵SjE16、SjPPIase和SjRobl基因的真核表達及其在診斷中的應(yīng)用

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【摘要】：目的真核表達日本血吸蟲蟲卵蛋白,并評價其在血吸蟲病免疫學(xué)診斷中的作用。方法提取日本血吸蟲蟲卵RNA,逆轉(zhuǎn)錄后獲得cDNA。PCR擴增日本血吸蟲蟲卵特異性或高表達基因SJCHGC01695(SjE16)、SJCHGC00856(SjIMA8)、SJCHGC06249(SjTOR)、SJCHGC06324(SjP40)、SJEFTD02(SjSLP)、SJCHGC06679(SjP-PIase)和SJCHGC06529(SjRobl),亞克隆至真核表達載體pPIC9K。重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至畢赤酵母GS115菌株后,甲醇誘導(dǎo)目的蛋白表達。鎳-次氮基三乙酸(Ni-NTA)親和層析純化獲取重組蛋白后,用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)對其進行分析鑒定。以血吸蟲可溶性蟲卵抗原(SEA)、重組蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl單用,3個重組蛋白兩兩伍用,及全部伍用作為包被抗原,ELISA法檢測血吸蟲感染小鼠血清、急性血吸蟲病和慢性血吸蟲病患者血清中相應(yīng)抗體的反應(yīng)性。結(jié)果PCR擴增獲得7個日本血吸蟲蟲卵高表達基因,經(jīng)酵母重組表達和Ni-NTA親和層析純化后成功獲得3個重組蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl。SDS-PAGE和Western blotting鑒定結(jié)果顯示,所獲得的重組蛋白為目的蛋白。ELISA檢測結(jié)果顯示,血吸蟲感染小鼠血清和血吸蟲病患者血清中均可檢測出被SjE16、SjPPIase和SjRobl識別的特異性IgM和IgG抗體。在急性血吸蟲病患者中上述3種抗原IgM的檢出率分別為80%、60%和80%,IgG檢出率分別為40%、80%和70%。伍用組中,SjE16和SjRobl伍用抗原,檢測急性血吸蟲病患者血清中IgM抗體的敏感性為100%,高于其單獨為抗原的敏感性。結(jié)論獲得的3個日本血吸蟲蟲卵蛋白(SjE16、SjPPIase和SjRobl)均具有血吸蟲病診斷的潛能,其中SjE16和SjRobl伍用抗原可提高急性血吸蟲病診斷敏感性。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲 蟲卵高表達基因 真核表達 免疫學(xué)診斷
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.30600517,81172808) 高等學(xué)校全國優(yōu)秀博士學(xué)位論文作者專項資金(No.201179)~~
【分類號】：R383.24
【正文快照】： 血吸蟲流行于76個國家,全球約有2.07億人患血吸蟲病,嚴重危害人類健康[1]。蟲卵是血吸蟲最主要的致病階段,沉積于宿主組織內(nèi)的蟲卵可分泌可溶性抗原刺激機體產(chǎn)生強烈的免疫應(yīng)答反應(yīng),形成蟲卵肉芽腫,對組織造成免疫損傷[2]。血吸蟲蟲卵抗原與宿主免疫反應(yīng)的關(guān)系一直為眾多研究

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王兆軍,胡薇,沈大康,武小文,王聚君,韓澤廣,薛純良;日本血吸蟲SjE16基因的原核表達及其免疫診斷應(yīng)用潛能[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2003年02期

2 盧艷;徐斌;鞠川;莫筱瑾;陳紳波;馮正;王小寧;胡薇;;日本血吸蟲含EF-手型結(jié)構(gòu)域鈣結(jié)合蛋白的克隆表達與免疫診斷分析[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2012年03期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭輝;吳峗;沈繼龍;;血吸蟲病免疫診斷抗原研究進展[J];臨床輸血與檢驗;2008年03期

2 潘麗紅;沈際佳;;重組抗原用于日本血吸蟲病免疫診斷研究進展[J];熱帶病與寄生蟲學(xué);2007年03期

3 胡永軒;肖建華;楊秋林;黃家芳;;Sjcb2基因原核表達載體的構(gòu)建及表達[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2006年08期

4 吳錦雅;周曉紅;陳曉光;;重組抗原用于血吸蟲病免疫診斷研究進展[J];中國血吸蟲病防治雜志;2006年04期

5 呂志躍;楊琳琳;胡旭初;周何軍;王麗;張雙民;孫希;胡斐;鄭煥欣;曹愛蓮;余新炳;吳忠道;;日本血吸蟲SjCa8基因的原核表達及其免疫學(xué)特征分析[J];中國地方病學(xué)雜志;2006年05期

6 鄭莉;徐興建;董惠芬;;日本血吸蟲特異性抗體與診斷抗原的應(yīng)用研究進展[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2005年06期

7 盧艷;徐斌;鞠川;莫筱瑾;陳紳波;馮正;王小寧;胡薇;;日本血吸蟲含EF-手型結(jié)構(gòu)域鈣結(jié)合蛋白的克隆表達與免疫診斷分析[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2012年03期

8 干小仙,王越,曾肖們,丁建祖,沈慧英,沈麗英,Paul Brindley,樊晉江;重組日本血吸蟲極低密度脂結(jié)合蛋白的抗原性及診斷價值的研究[J];中國人獸共患病雜志;2004年08期

9 李俊立;王昌富;;日本血吸蟲病重組診斷抗原研究進展[J];中國血吸蟲病防治雜志;2013年01期

10 魏剛剛;徐斌;鞠川;胡薇;;日本血吸蟲核糖體蛋白SjRibosom al_L18a及其B細胞表位的篩選和評價[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2013年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 盧艷;日本血吸蟲診斷抗原的篩選、鑒定及初步評價[D];華東理工大學(xué);2012年

2 聞禮永;日本血吸蟲大陸株硫氧還蛋白在畢氏酵母菌的克隆表達及其免疫反應(yīng)性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 吳錦雅;重組SjP38抗原診斷日本血吸蟲病的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 鄭莉;湖北省血吸蟲病病情分析及檢測方法的改進[D];武漢大學(xué);2005年

3 李敏;日本血吸蟲信號蛋白14-3-3的免疫診斷及蟲卵cDNA文庫的構(gòu)建[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

4 潘麗紅;重組Sj-Ts4樣蛋白在日本血吸蟲病免疫診斷中的初步應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

5 李友;牛血吸蟲病分子ELISA診斷方法的建立和應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

6 鄭輝;日本血吸蟲成蟲可溶性抗原蛋白質(zhì)譜鑒定與生物信息學(xué)分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

7 余路新;日本血吸蟲重組蛋白抗原RPS4診斷血吸蟲病的研究[D];中南大學(xué);2009年

8 王萍;日本血吸蟲重組膜外蛋白rSj29免疫診斷的初步應(yīng)用及代謝抗原單克隆抗體的制備[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

9 郭艷紅;家畜日本血吸蟲病診斷試紙條研制及望江縣放牧牛蠕蟲感染狀況調(diào)查[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 于復(fù)東;康斌;李園園;李亦學(xué);;預(yù)測和分析血吸蟲含有EF-hand結(jié)構(gòu)域的表膜蛋白的功能[J];科學(xué)通報;2007年13期

2 周帥鋒;余路新;汪世平;;血吸蟲病的診斷檢測技術(shù)及研究進展[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

3 郝陽;鄭浩;朱蓉;郭家鋼;王立英;陳朝;周曉農(nóng);;2009年全國血吸蟲病疫情通報[J];中國血吸蟲病防治雜志;2010年06期

4 舒新華,易新元;重組血吸蟲診斷抗原研究進展[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2000年04期

5 王兆軍,胡薇,沈大康,武小文,王聚君,韓澤廣,薛純良;日本血吸蟲SjE16基因的原核表達及其免疫診斷應(yīng)用潛能[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2003年02期

6 鄭莉;徐興建;董惠芬;;日本血吸蟲特異性抗體與診斷抗原的應(yīng)用研究進展[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2005年06期

7 蔡輝霞;沈玉娟;韓秀敏;袁忠英;王虎;徐馀信;胡媛;盧濰媛;官亞宜;曹建平;;細粒棘球蚴抗原EPC1基因的克隆、表達及其免疫診斷的研究[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2011年03期

8 盧艷;徐斌;鞠川;莫筱瑾;陳紳波;馮正;王小寧;胡薇;;日本血吸蟲蟲卵cDNA文庫的免疫篩選和陽性克隆的鑒定[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2012年02期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 彭善友,黎輝,王則勝;日本血吸蟲蟲卵的圖像分析研究[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2000年04期

2 彭善友,黎輝,王則勝;日本血吸蟲蟲卵的二維數(shù)據(jù)測量[J];中國寄生蟲病防治雜志;2001年01期

3 朱明東,洪玲娣,卓敏敏,林祖昌;日本血吸蟲蟲卵分離方法的改進[J];中國血吸蟲病防治雜志;1998年03期

4 許世鍔,陸秀君,謝霖崇,張大鵬,胡隆大;日本血吸蟲蟲卵、毛蚴及尾蚴的掃描電鏡觀察[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1983年04期

5 Cheever AW ,陳名剛;日本血吸蟲實驗感染的病理學(xué)[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1986年01期

6 張國芳,陳孝齡,藤懷妹;日本血吸蟲蟲卵不同發(fā)育期的掃描電鏡觀察[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1986年04期

7 陳國瑜;;體外培養(yǎng)日本血吸蟲蟲卵直至孵出毛蚴以及向胞蚴轉(zhuǎn)變的研究[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志;1986年04期

8 張立煌;抗IL-5和抗IFN-γ抗體對感染日本血吸蟲小鼠蟲卵肉芽腫形成的作用[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1992年06期

9 黃成玉;盧艷;王瑋;鞠川;馮正;楊忠;王升躍;胡薇;;日本血吸蟲彈性蛋白酶基因的克隆、表達及蟲期特異性轉(zhuǎn)錄[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2007年05期

10 溫慧初;用放射免疫試驗檢測人血清中抗日本血吸蟲蟲卵抗體[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1982年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 葉冬青;;血吸蟲病防治的出路在何方[A];“安徽公共衛(wèi)生體系建設(shè)”——首屆安徽博士科技論壇論文集[C];2003年

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本文編號：954708