本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵SjE16、SjPPIase和SjRobl基因的真核表達(dá)及其在診斷中的應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 日本血吸蟲(chóng) 蟲(chóng)卵高表達(dá)基因 真核表達(dá) 免疫學(xué)診斷

【摘要】：目的真核表達(dá)日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵蛋白,并評(píng)價(jià)其在血吸蟲(chóng)病免疫學(xué)診斷中的作用。方法提取日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵RNA,逆轉(zhuǎn)錄后獲得cDNA。PCR擴(kuò)增日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵特異性或高表達(dá)基因SJCHGC01695(SjE16)、SJCHGC00856(SjIMA8)、SJCHGC06249(SjTOR)、SJCHGC06324(SjP40)、SJEFTD02(SjSLP)、SJCHGC06679(SjP-PIase)和SJCHGC06529(SjRobl),亞克隆至真核表達(dá)載體pPIC9K。重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至畢赤酵母GS115菌株后,甲醇誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)。鎳-次氮基三乙酸(Ni-NTA)親和層析純化獲取重組蛋白后,用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)對(duì)其進(jìn)行分析鑒定。以血吸蟲(chóng)可溶性蟲(chóng)卵抗原(SEA)、重組蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl單用,3個(gè)重組蛋白兩兩伍用,及全部伍用作為包被抗原,ELISA法檢測(cè)血吸蟲(chóng)感染小鼠血清、急性血吸蟲(chóng)病和慢性血吸蟲(chóng)病患者血清中相應(yīng)抗體的反應(yīng)性。結(jié)果PCR擴(kuò)增獲得7個(gè)日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵高表達(dá)基因,經(jīng)酵母重組表達(dá)和Ni-NTA親和層析純化后成功獲得3個(gè)重組蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl。SDS-PAGE和Western blotting鑒定結(jié)果顯示,所獲得的重組蛋白為目的蛋白。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,血吸蟲(chóng)感染小鼠血清和血吸蟲(chóng)病患者血清中均可檢測(cè)出被SjE16、SjPPIase和SjRobl識(shí)別的特異性IgM和IgG抗體。在急性血吸蟲(chóng)病患者中上述3種抗原IgM的檢出率分別為80%、60%和80%,IgG檢出率分別為40%、80%和70%。伍用組中,SjE16和SjRobl伍用抗原,檢測(cè)急性血吸蟲(chóng)病患者血清中IgM抗體的敏感性為100%,高于其單獨(dú)為抗原的敏感性。結(jié)論獲得的3個(gè)日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵蛋白(SjE16、SjPPIase和SjRobl)均具有血吸蟲(chóng)病診斷的潛能,其中SjE16和SjRobl伍用抗原可提高急性血吸蟲(chóng)病診斷敏感性。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲(chóng) 蟲(chóng)卵高表達(dá)基因 真核表達(dá) 免疫學(xué)診斷
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.30600517,81172808) 高等學(xué)校全國(guó)優(yōu)秀博士學(xué)位論文作者專(zhuān)項(xiàng)資金(No.201179)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R383.24
【正文快照】： 血吸蟲(chóng)流行于76個(gè)國(guó)家,全球約有2.07億人患血吸蟲(chóng)病,嚴(yán)重危害人類(lèi)健康[1]。蟲(chóng)卵是血吸蟲(chóng)最主要的致病階段,沉積于宿主組織內(nèi)的蟲(chóng)卵可分泌可溶性抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答反應(yīng),形成蟲(chóng)卵肉芽腫,對(duì)組織造成免疫損傷[2]。血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵抗原與宿主免疫反應(yīng)的關(guān)系一直為眾多研究

【參考文獻(xiàn)】

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2 盧艷;徐斌;鞠川;莫筱瑾;陳紳波;馮正;王小寧;胡薇;;日本血吸蟲(chóng)含EF-手型結(jié)構(gòu)域鈣結(jié)合蛋白的克隆表達(dá)與免疫診斷分析[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2012年03期

【共引文獻(xiàn)】

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7 蔡輝霞;沈玉娟;韓秀敏;袁忠英;王虎;徐馀信;胡媛;盧濰媛;官亞宜;曹建平;;細(xì)粒棘球蚴抗原EPC1基因的克隆、表達(dá)及其免疫診斷的研究[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2011年03期

8 盧艷;徐斌;鞠川;莫筱瑾;陳紳波;馮正;王小寧;胡薇;;日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵cDNA文庫(kù)的免疫篩選和陽(yáng)性克隆的鑒定[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2012年02期

【相似文獻(xiàn)】

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10 溫慧初;用放射免疫試驗(yàn)檢測(cè)人血清中抗日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵抗體[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)病雜志;1982年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 葉冬青;;血吸蟲(chóng)病防治的出路在何方[A];“安徽公共衛(wèi)生體系建設(shè)”——首屆安徽博士科技論壇論文集[C];2003年

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本文編號(hào)：954708