發(fā)布時間：2017-10-01 01:01

  本文關(guān)鍵詞：TNF-α增強(qiáng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的體外造血支持功能

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【摘要】：目的:研究腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)刺激后所得的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基對臍血CD34+細(xì)胞在半固體培養(yǎng)基中集落形成個數(shù)及種類的影響。方法:將3～6代人臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)以2×106接種到75cm2培養(yǎng)瓶中,其中刺激組加入TNF-α(10 g/L),48 h后收集上清作為條件培養(yǎng)基。Real-time PCR檢測hUC-MSCs中各類造血因子mRNA的表達(dá)量。密度梯度離心法分離臍血單個核細(xì)胞,磁珠分選CD34+細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞純度后分5組接種到6孔板內(nèi):TNF-α刺激hUC-MSC上清+不完全甲基纖維素培養(yǎng)基;hUC-MSC上清+不完全甲基纖維素培養(yǎng)基;TNF-α+DMEM/F12完全培養(yǎng)基+不完全甲基纖維素培養(yǎng)基;完全甲基纖維素培養(yǎng)基;DMEM/F12完全培養(yǎng)基+不完全甲基纖維素培養(yǎng)基。10 d后顯微鏡下計(jì)數(shù)各類集落形成單位(colony-forming unit,CFU)的數(shù)目,收集集落形成細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測其表型特征。結(jié)果:(1)TNF-α刺激后hUC-MSCs中粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)和白細(xì)胞介素6(interleukin-6,IL-6)mRNA表達(dá)上調(diào)。(2)兩種條件培養(yǎng)組均可見粒系CFU(granulocyte CFU,CFU-G)、巨噬系CFU(macrophage CFU,CFU-M)和粒巨噬系CFU(granulocyte-macrophage CFU,CFU-GM),但TNF-α刺激組CFU-G和CFU-M的數(shù)目約為未刺激組的1.5倍,CFU-GM約為未刺激組的2倍;陽性對照組中除粒系、巨噬系集落外還可見紅系集落;而DMEM/F12完全培養(yǎng)基加或不加TNF-α組10 d后均未見集落形成。(3)流式細(xì)胞術(shù)檢測TNF-α刺激組與未刺激組集落細(xì)胞表型CD14、CD45和CD11b,未見明顯差異。結(jié)論:hUC-MSC上清作為條件培養(yǎng)基可在體外促進(jìn)CD34+細(xì)胞分化增殖為髓系細(xì)胞,具有造血支持作用,TNF-α刺激后此作用增強(qiáng)。
【作者單位】： 暨南大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院血液病研究所;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所泰達(dá)生命科學(xué)技術(shù)研究中心;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液學(xué)研究所 實(shí)驗(yàn)血液學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 間充質(zhì)干細(xì)胞 腫瘤壞死因子α 造血支持
【基金】：國家重大科學(xué)計(jì)劃“973計(jì)劃”(No.2011CB964800)
【分類號】：R363
【正文快照】： 造血干/祖細(xì)胞的獲得及恢復(fù)一直被認(rèn)為是各類血液腫瘤治療的關(guān)鍵,體外擴(kuò)增造血干細(xì)胞后回輸?shù)介L期化療患者體內(nèi)是主要治療手段,早期的實(shí)驗(yàn)通過在長期培養(yǎng)體系中加入各種細(xì)胞因子如干細(xì)胞因子(stem cell factor,SCF)、白細(xì)胞介素(interleu-kin,IL)-3、IL-6、IL-1等來促進(jìn)CD34+

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 毛文哲;許超;李揚(yáng)秋;陳少華;柳菁;劉俊;廖繼東;;長期培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞PCNA、IL-6、IL-11和galectin-3的表達(dá)[J];中國病理生理雜志;2012年06期

2 莫世靜;童秀珍;鐘茜;鄧宇斌;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過上調(diào)EPO表達(dá)減輕缺氧損傷引起的PC12細(xì)胞凋亡[J];中國病理生理雜志;2013年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 李田;李小毛;陳少宏;許成芳;張琪;;不同凍存液對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];器官移植;2013年05期

2 曾慧蘭;卜欠欠;陳慧中;覃永亮;李陽;柏小芬;鐘啟;余泮熹;劉宏偉;劉革修;蘇澤軒;;尼古丁對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和遷移的影響[J];中國病理生理雜志;2013年05期

3 王旭;張帆;徐艷;吳秀麗;陳少華;楊力建;李，

本文編號：951393