本文關(guān)鍵詞：CXCR4基因shRNA表達質(zhì)粒的構(gòu)建及篩選鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建編碼CXCR4 mRNA的短發(fā)卡樣RNA(shRNA)表達質(zhì)粒用以篩選出基因沉默效果最明顯的shRNA質(zhì)粒表達載體。方法根據(jù)GenBank中登錄的CXCR4基因的核苷酸序列,應(yīng)用shRNA設(shè)計軟件設(shè)計并合成4條短發(fā)卡shRNA的oligo DNA,構(gòu)建shRNA重組質(zhì)粒。采用酶切電泳和測序方法進行鑒定。將鑒定后的CXCR4基因shRNA重組質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤U251細胞,24 h后經(jīng)RT-PCR篩選有效的shRNA重組質(zhì)粒。結(jié)果構(gòu)建的質(zhì)粒表達載體PCR鑒定均可擴增出目的條帶,DNA測序結(jié)果與理論序列完全一致。RT-PCR檢測顯示,轉(zhuǎn)染pGPU6/GFP/Rac1-421的U251細胞CXCR4基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平下降。結(jié)論成功構(gòu)建CXCR4基因shRNA表達質(zhì)粒,并篩選出效果最為明顯的shRNA質(zhì)粒表達載體為pGPU6/GFP/Rac1-421。
【作者單位】： 白城中心醫(yī)院;吉林大學(xué)第二醫(yī)院;吉林省申邦細胞工程研究所;
【關(guān)鍵詞】： CXC趨化因子受體 RNA干擾 U細胞
【基金】：吉林省自然科學(xué)基金(No.201015175)
【分類號】：R346
【正文快照】： 膠質(zhì)瘤是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,由于其發(fā)病機制不明確,目前主要以手術(shù)治療為主,輔以放療、化療和免疫治療,雖然取得了一定的臨床效果,但并未從根本上提高膠質(zhì)瘤患者的總體預(yù)后。趨化因子受體4(CXCR4),作為基質(zhì)細胞衍生因子(SDF-1)的唯一配體,在卵巢、胃、甲狀腺、乳腺、肺、

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