本文關(guān)鍵詞：植原體免疫主導(dǎo)膜蛋白A的原核表達(dá)載體構(gòu)建、表達(dá)及其抗血清制備

  更多相關(guān)文章： 植原體 免疫主導(dǎo)膜蛋白 原核表達(dá) 重組蛋白IdpA 抗血清

【摘要】：目的構(gòu)建植原體免疫主導(dǎo)膜蛋白A(IdpA)的原核表達(dá)載體,表達(dá)并純化目的蛋白,制備抗血清。方法以重組克隆質(zhì)粒pMD18-T-IdpA為模板PCR擴(kuò)增IdpA基因片段,經(jīng)酶切連接將IdpA基因克隆到原核表達(dá)載體pET-28a(+),重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coli BL21(DE3),PCR和雙酶切進(jìn)行鑒定。IPTG誘導(dǎo)重組菌表達(dá)IdpA蛋白,并進(jìn)行純化和鑒定,以純化獲得的IdpA蛋白為抗原免疫BALB/c小鼠制備抗血清,并采用ELISA和Western blot法檢測(cè)抗血清的效價(jià)和特異性。結(jié)果成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-28a(+)-IdpA,并在大腸桿菌中能穩(wěn)定表達(dá)IdpA蛋白,經(jīng)純化獲得了純度大于90%的高純度目的蛋白,用純化的IdpA蛋白免疫BALB/c小鼠,獲得了效價(jià)高于1∶320 000的強(qiáng)特異性抗IdpA蛋白抗血清。結(jié)論成功進(jìn)行了IdpA的原核表達(dá)并制備了抗血清。
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院;深圳市蘭科植物保護(hù)研究中心;深圳市出入境檢驗(yàn)檢疫局;
【關(guān)鍵詞】： 植原體 免疫主導(dǎo)膜蛋白 原核表達(dá) 重組蛋白IdpA 抗血清
【基金】：深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目(JC200903180710A,JSA200903170245A)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 1967年,日本科學(xué)家土居養(yǎng)二等首次在桑樹萎縮病中發(fā)現(xiàn)植原體(phytoplasma),植原體是一類GC含量比較低,無(wú)細(xì)胞壁,僅有3層單位膜包被的原核微生物,專性寄生于植物和昆蟲,迄今在離體的無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基上尚未培養(yǎng)成功[1]。植物染病主要癥狀包括叢枝、黃化、花變?nèi)~、花器退化等,由于

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本文編號(hào)：943766