發(fā)布時(shí)間：2017-09-28 05:38

  本文關(guān)鍵詞：抗鼠疫耶爾森菌莢膜抗原F1嵌合抗體的制備及活性分析

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【摘要】：目的在中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞中表達(dá)抗鼠疫耶爾森菌莢膜抗原F1嵌合抗體,并對(duì)其活性進(jìn)行分析。方法將具有保護(hù)活性的鼠源單克隆抗體(mAb)的輕、重鏈可變區(qū)基因,分別與人κ型輕鏈恒定區(qū)、IgG1重鏈恒定區(qū)基因融合后構(gòu)建輕重鏈嵌合抗體基因,克隆到T載體上進(jìn)行序列測(cè)定確證。然后分別構(gòu)建含有嵌合輕、重鏈基因的表達(dá)載體pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H。構(gòu)建完成的表達(dá)載體電轉(zhuǎn)化CHO-S細(xì)胞,G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。擴(kuò)大培養(yǎng)、收集上清用MabSelect Sure親和層析填料純化。純化后的抗體進(jìn)行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠體內(nèi)保護(hù)活性評(píng)價(jià)。結(jié)果 PCR鑒定及測(cè)序結(jié)果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L構(gòu)建完成,序列正確;Dot blot結(jié)果表明獲得表達(dá)量高的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞;SDSPAGE及Western blot法證明抗體純化獲得成功,ELISA結(jié)果表明該抗體具有結(jié)合與F1抗原的活性;小鼠體內(nèi)攻擊實(shí)驗(yàn)表明其保護(hù)活性與鼠mAb大致相同。結(jié)論成功在CHO-S細(xì)胞中表達(dá)了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗體。
【作者單位】： 解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所疫苗與抗體工程研究室;
【關(guān)鍵詞】： 鼠疫 F 嵌合抗體 中國倉鼠卵巢細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81000710) “重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)(2013ZX09304103)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 鼠疫是一種自然疫源性疾病,可獨(dú)立在動(dòng)物中流行,全世界有各種類型的動(dòng)物自然疫源地,難于徹底消除。我國仍有11個(gè)疫源地省區(qū),人間鼠疫時(shí)有發(fā)生[1]。另外,鼠疫菌被列為重要的生物戰(zhàn)劑和生物恐怖劑,一直受到高度重視。更為重要的是多藥抗性鼠疫菌的發(fā)現(xiàn),使得鼠疫的治療更是雪上加

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李冰;李建民;徐俊杰;劉樹玲;張羽;付玲;陳薇;;抗炭疽保護(hù)性抗原單克隆抗體可變區(qū)基因的克隆及序列分析[J];生物技術(shù)通訊;2007年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李鵬;劉鳳權(quán);楊慧;趙麗;李霞;;鋅螯合物抗體可變區(qū)的克隆鑒定、真核表達(dá)及重組抗體的三維模建[J];生物技術(shù)通報(bào);2012年01期

2 李冰;張軍;徐俊杰;劉樹玲;付玲;李建民;陳薇;;人源化抗炭疽芽胞桿菌保護(hù)性抗原單鏈抗體的設(shè)計(jì)和表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙麗;三種重金屬單抗的制備與抗體基因序列分析及其免疫檢測(cè)方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李瑩;應(yīng)對(duì)生物恐怖襲擊醫(yī)學(xué)防治技術(shù)的情報(bào)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐俊杰,張軍,劉樹玲,呂天敬,陳薇,李冠霖,葛猛,郭強(qiáng);針對(duì)炭疽保護(hù)性抗原不同結(jié)構(gòu)域的中和性單克隆抗體的篩選和鑒定[J];微生物學(xué)報(bào);2005年06期

2 周昌奎;嵌合抗體的基因克隆、表達(dá)及應(yīng)用前景[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1995年01期

3 陳志南,邢金良,楊向民,宋斐,張思河;抗人肝癌單克隆抗體HAb18 Fd及輕鏈基因的克隆與鑒定[J];中國腫瘤生物治療雜志;2003年02期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊林,林紀(jì)春,徐秉臣;ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)FI抗原在鼠疫菌鑒定中的初步應(yīng)用[J];地方病通報(bào);1987年03期

2 小次仁,陳虹,于德江;自尸體一手指骨檢出鼠疫菌的報(bào)告[J];西藏醫(yī)藥雜志;1993年02期

3 董興齊;鼠疫菌質(zhì)粒種類功能及在流行病學(xué)中的應(yīng)用進(jìn)展[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志;1994年03期

4 顧峰,申晶,宋志忠,楊桂榮,趙銘山;感染鼠疫菌的植物作為傳染源的研究[J];中國地方病防治雜志;1998年03期

5 汪立茂,宋曉玉,薛梅,李富忠,蔣和柱,王曉;四川省首次檢出鼠疫菌情況分析[J];中國地方病防治雜志;1999年05期

6 谷春廣,張春華,叢顯斌,閆衛(wèi)東,徐國鑫,王忠惠,岳明祥,趙銘山,張晶仁;吉林西北部草原鼠疫菌表型性狀的研究[J];中國地方病防治雜志;2000年04期

7 王忠惠,谷春廣,張春華,閆衛(wèi)東,叢顯斌,徐國鑫,岳明祥,張晶仁;吉林西北部草原鼠疫菌外膜蛋白的研究[J];中國地方病防治雜志;2001年04期

8 戴瑞霞,金麗霞,祁芝珍;西藏藏南地區(qū)鼠疫菌某些生物學(xué)特征及流行病學(xué)分析[J];中國地方病防治雜志;2001年06期

9 孫利仁,張春華,叢顯斌,劉振才;鼠疫菌質(zhì)粒及變異分析[J];中國地方病防治雜志;2002年03期

10 徐成,房靜,孫啟庭,孫鑫廣,張鐵軍;蚤與鼠疫菌之間的生物學(xué)關(guān)系[J];中國地方病防治雜志;2002年06期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 熱娜·吐爾地;徐秉臣;阿扎提·熱合木;孫石;雷剛;;酶免疫染色法快速檢驗(yàn)鼠疫菌[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2002年

2 張雪;張愛華;閉蘭;趙亞杰;孫可芳;方志正;;抗人T淋巴細(xì)胞CD4人-鼠嵌合抗體真核表達(dá)的研究[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

3 劉兢;李平;程聯(lián)勝;;抗腫瘤表面抗原P185~(erbB-2)單克隆抗體的工程化嵌合抗體的制備和性質(zhì)鑒定[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)、免疫細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2002年

4 董興齊;張洪英;彭和碧;Chu C.May;;鼠疫菌—新質(zhì)粒的限制性酶切圖譜[A];西部大開發(fā) 科教先行與可持續(xù)發(fā)展——中國科協(xié)2000年學(xué)術(shù)年會(huì)文集[C];2000年

5 王準(zhǔn);胡洪波;崔蓮仙;何維;;γδTCR CDR3嵌合抗體抗腫瘤的初步研究[A];第九屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

6 宋亞軍;;鼠疫耶爾森氏菌比較與進(jìn)化基因組學(xué)研究[A];2006中國微生物學(xué)會(huì)第九次全國會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2006年

7 李永;黃建華;楊其彬;周發(fā)林;江世貴;;斑節(jié)對(duì)蝦2個(gè)地理種群自交與雜交F1代生長(zhǎng)性能研究[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

8 趙萬里;王勝;;從奧運(yùn)競(jìng)技場(chǎng)到F1賽車場(chǎng)亞科線性排水技術(shù)大顯身手[A];2010年全國給水排水技術(shù)信息網(wǎng)年會(huì)論文集[C];2010年

9 陳江;;野生日本鳴鶉和家鶉雜交F1育性研究[A];蘇州市自然科學(xué)優(yōu)秀學(xué)術(shù)論文匯編(2008-2009)[C];2010年

10 劉奕;董艷秋;劉兢;;穩(wěn)定高表達(dá)anti-p185嵌合抗體的細(xì)胞株的篩選和鑒定[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 張麗華;上海F1賽事新季尋策生意之外搭建“第二外交平臺(tái)”[N];第一財(cái)經(jīng)日?qǐng)?bào);2011年

2 記者 周軒千;F1社會(huì)效益大于經(jīng)濟(jì)效益[N];上海金融報(bào);2011年

3 特約記者 衣鵬;上海F1演變[N];21世紀(jì)經(jīng)濟(jì)報(bào)道;2009年

4 王雪飛;鼠疫檢測(cè)新技術(shù)身手不凡 30分鐘內(nèi)鎖定鼠疫菌及抗體[N];健康報(bào);2007年

5 ;普巴軟件：F1協(xié)同管理平臺(tái)[N];中國計(jì)算機(jī)報(bào);2010年

6 江一寧;自貢大學(xué)生開發(fā)“概念車”比F1賽車還要苗條[N];四川科技報(bào);2008年

7 記者 范京蓉;F1摩托艇世錦賽拉開戰(zhàn)幕[N];深圳特區(qū)報(bào);2008年

8 北京華旗資訊科技發(fā)展有限公司副總裁 張永捷　黃光偉;愛國者支持F1邁凱輪車隊(duì)[N];電腦商報(bào);2008年

9 靳文東;F1代進(jìn)口仙客來品種應(yīng)用指南[N];中國花卉報(bào);2008年

10 通訊員 劉華　馬香;F1——1600輕型泥漿泵在寶石公司研制成功[N];中國石油報(bào);2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱志剛;抗CD45人—鼠嵌合抗體的構(gòu)建、表達(dá)與鑒定[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

2 李建民;抗基孔肯亞病毒單克隆抗體人源化及真核細(xì)胞高效表達(dá)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

3 林周;人TNF-α嵌合抗體體外親和力成熟作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

4 胡洪波;γδT細(xì)胞抗原識(shí)別機(jī)制研究—含γδTCR CDR3δ序列嵌合抗體的構(gòu)建及其抗原結(jié)合特異性和SARS相關(guān)冠狀病毒B細(xì)胞抗原表位的篩選[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

5 譚亞芳;鼠疫耶爾森氏菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)效應(yīng)蛋白YopK在致病機(jī)制中的作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

6 王玉剛;基于計(jì)算機(jī)輔助分子設(shè)計(jì)的抗CD20單克隆抗體的改造[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

7 陳澤良;鼠疫耶爾森氏菌密度感應(yīng)系統(tǒng)與毒力關(guān)系研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

8 李蓓;鼠疫耶爾森氏菌候選疫苗靶標(biāo)的篩選與初步驗(yàn)證[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

9 寇庚;SM5-1單克隆抗體的人源化及其體內(nèi)外抗腫瘤作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 周蕾;鼠疫耶爾森氏菌密度感應(yīng)系統(tǒng)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 汪潔英;鼠疫雙組分疫苗的免疫學(xué)評(píng)價(jià)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

2 劉軼然;示蹤鼠疫菌構(gòu)建及吞噬細(xì)胞對(duì)其吞噬能力的觀察[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

3 尚帥;載鼠疫亞單位疫苗的多孔微球[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

4 胡翠平;百合雜交F1代遺傳變異性狀分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 張曉曉;抗?jié)h坦病毒鼠/人嵌合抗體真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 魏嘉良;蜱傳媒病中鼠疫、野兔熱病原檢測(cè)方法的建立及疫病情況調(diào)查[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 張全愛;組織因子人—鼠嵌合抗體制備的研究[D];山西大學(xué);2010年

8 王旺;鼠疫亞單位疫苗的制備及其在獼猴中的免疫保護(hù)作用評(píng)價(jià)[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

9 姜慧;1942年河套地區(qū)鼠疫研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2012年

10 化曉莉;抗人CD40人—鼠嵌合抗體的構(gòu)建表達(dá)及功能的初步研究[D];蘇州大學(xué);2010年

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