本文關(guān)鍵詞：穿膜肽AR-23增強(qiáng)聚乙烯亞胺介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染效率及其機(jī)制的初步研究

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【摘要】：目的研究穿膜肽AR-23[蜂毒肽相關(guān)肽,來自日本蛙(Rana tagoi)]的極性電荷區(qū)對細(xì)胞穿膜作用的影響及其在促進(jìn)聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI)介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染中的作用。方法分別合成了穿膜肽AR-23及由疏水核心區(qū)組成的截短肽AR-20;利用圓二色譜(CD)分析二級結(jié)構(gòu);通過溶血實(shí)驗(yàn)比較兩者的細(xì)胞膜穿透能力;利用去極化實(shí)驗(yàn)分析穿膜肽與細(xì)胞膜的相互作用方式;將穿膜肽與PEI按一定比例混合,以綠色熒光蛋白(GFP)和熒光素酶(luciferase)為報(bào)告基因檢測基因在HeLa和RAW264.7細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率,用MTT法測定基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的毒性。結(jié)果在以甲醇模擬的細(xì)胞膜環(huán)境中,AR-23呈現(xiàn)出典型的α-螺旋結(jié)構(gòu),α-螺旋率為37.6%,而AR-20未呈現(xiàn)出典型的α-螺旋結(jié)構(gòu)峰;在偏酸性和中性條件下,AR-23均能穿透細(xì)胞膜導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血,而AR-20不具備溶血作用;AR-23對細(xì)胞膜具有較強(qiáng)的去極化作用,而AR-20去極化能力極弱;AR-23可明顯增強(qiáng)PEI介導(dǎo)的基因在HeLa和RAW264.7細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率,并且不引起轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的S毒性,AR-20則不具備增強(qiáng)基因轉(zhuǎn)染效率的作用。結(jié)論 AR-23的極性電荷區(qū)對于維持其α-螺旋結(jié)構(gòu)和穿膜能力至關(guān)重要。AR-23能夠提高PEI介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染效率而不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性,是一種理想的基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑。
【作者單位】： 中南大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所;
【關(guān)鍵詞】： 蜂毒肽 穿膜肽 聚乙烯亞胺 膜穿透活性 基因轉(zhuǎn)染
【分類號】：R392
【正文快照】： 基因治療的關(guān)鍵是如何高效地將目的基因遞送到靶細(xì)胞并且發(fā)揮生物學(xué)功能,在此過程中,基因載體發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。基因載體分為病毒載體和非病毒載體,常用的病毒載體如腺病毒和慢病毒等,雖然經(jīng)過改造去除了病原性而保留了高水平的基因遞送效率,但其制備困難,目的基因插入

【共引文獻(xiàn)】

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1 王傅U，

本文編號：921911