本文關(guān)鍵詞：抗組氨酸標(biāo)簽單克隆抗體的制備、鑒定及應(yīng)用

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【摘要】：目的制備特異性抗組氨酸標(biāo)簽(His-tag)的單克隆抗體(mAb)并進行鑒定。方法以合成的15個組氨酸的多肽耦聯(lián)牛血清清蛋白(BSA)為抗原免疫Balb/c小鼠,按常規(guī)方法進行細胞融合。采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)篩選陽性克隆及有限稀釋法進行克隆化,用Protein G柱親和純化抗體及ELISA檢測純化抗體的效價、相對親和力及抗體亞類,用ELISA及Western blotting對mAb的特異性進行鑒定,并與含His-tag的重組蛋白特異性抗體配對建立雙抗夾心ELISA定量檢測對應(yīng)的重組蛋白。結(jié)果篩選出5株能穩(wěn)定分泌抗His-tag的雜交瘤細胞株,抗體亞類均為IgG1(κ),其中1-G2親和力最高(1.27×1010),并且1-G2在ELISA及Western blotting中能與不同類型的含His-tag的重組蛋白結(jié)合,能與降鈣素原(PCT)抗體構(gòu)建雙抗夾心ELISA定量檢測含His-tag的PCT重組蛋白,靈敏度達到4.6ng/mL。結(jié)論成功制備了特異性好、親和力高、能穩(wěn)定分泌抗His-tag的mAb,該抗體能應(yīng)用于ELISA及Western blotting等多種His-tag的檢測方法,為蛋白質(zhì)研究檢測、定位、相互作用等提供了工具。
【作者單位】： 解放軍第八二醫(yī)院一四九臨床部;
【關(guān)鍵詞】： 抗體 單克隆 酶聯(lián)免疫吸附測定 印跡法 蛋白質(zhì) 組氨酸標(biāo)簽
【基金】：全軍醫(yī)藥衛(wèi)生科研資助項目(11MA048)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 抗組氨酸標(biāo)簽(histidine-tag,His-tag)是由6個或6個以上組氨酸組成的短肽,其主要用途是用于表達分子構(gòu)建融合蛋白的快速分離及純化,與其他標(biāo)簽相比具有相對分子質(zhì)量小、免疫原性弱,不影響目的分子空間構(gòu)型等優(yōu)勢。利用His-tag親和鎳離子螯合物的特性,采用固定化金屬離子親和

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4 杜雪梅;唐麗;任飛W，

本文編號：919581