本文關(guān)鍵詞：重組人EGFL6在HEK293細胞中的瞬時表達

  更多相關(guān)文章： EGFL 瞬時表達 HEKT 腫瘤細胞

【摘要】：旨在通過構(gòu)建EGFL6的真核表達載體,在HEK293T細胞中進行表達,并利用HEK293T細胞表達的EGFL6條件培養(yǎng)基,探討EGFL6對人黑色素瘤A375細胞和人卵巢癌SKOV3細胞增殖的影響。利用PCR方法亞克隆得到的EGFL6基因片段及EGFP基因片段,用重疊PCR方法構(gòu)建成EGFP-EGFL6融合基因片段,并分別將測序正確的EGFP-EGFL6融合基因片段及EGFP基因片段構(gòu)建到真核表達載體pAAV中。表達載體質(zhì)粒去內(nèi)毒素純化后,瞬時轉(zhuǎn)染HEK293T細胞進行表達,熒光定位分析和Western blot檢測EGFL6的表達。CCK-8試驗分析含EGFP-EGFL6融合蛋白的HEK293T條件培養(yǎng)基對A375細胞和SKOV3細胞的增殖能力的影響。結(jié)果顯示,酶切鑒定pAAV-EGFP-EGFL6和pAAV-EGFP兩個重組表達載體均構(gòu)建成功;EGFP熒光定位及Western blot結(jié)果均顯示EGFP-EGFL6在HEK293T細胞中成功表達;增殖抑制試驗結(jié)果顯示EGFL6促進了A375和SKOV3細胞的增殖,對腫瘤細胞的促增殖率分別達到(37.79±14.05)%和(30.53±6.31)%。成功地將EGFP應(yīng)用于EGFL6真核表達載體的構(gòu)建與表達,結(jié)果表明人EGFL6促進了A375和SKOV3細胞的增殖。
【作者單位】： 廣東省分子免疫與抗體工程重點實驗室
【關(guān)鍵詞】： EGFL 瞬時表達 HEKT 腫瘤細胞
【基金】：國家“863”項目(2009AA02Z112) 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金項目(21612112)
【分類號】：R363;Q78
【正文快照】： Yeung等[1]于1999年首次用DNA分子雜交高通量篩選的方法,發(fā)現(xiàn)了一個新的EGF重復(fù)域超家族成員,并將其命名為表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白6(EGF-like-domain,multiple 6,EGFL6)。Buchner等[2]也發(fā)現(xiàn)了這個蛋白,命名為MAEG(MAM-andEGF-containing gene),定位于Xp22染色體上。后續(xù)的

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 郝拉娣,于化東;標(biāo)準(zhǔn)差與標(biāo)準(zhǔn)誤[J];編輯學(xué)報;2005年02期

2 覃曉琳;劉朝奇;唐國慧;金羽;孫儷;;小鼠可溶性PD1的克隆、真核表達及生物學(xué)活性檢測[J];生物技術(shù)通報;2011年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王春林;X染色體隱性遺傳性生長激素缺乏癥家系候選基因定位研究[D];浙江大學(xué);2012年

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 曾潔美;;礦山經(jīng)濟數(shù)據(jù)缺失處理問題及研究[J];工業(yè)控制計算機;2011年12期

2 丁建麗;姚遠;;干旱區(qū)稀疏植被覆蓋條件下地表土壤水分微波遙感估算[J];地理科學(xué);2013年07期

3 王萍;戴芳;;一種新的運動員號碼布數(shù)字分割算法[J];計算機應(yīng)用與軟件;2010年07期

4 楊晶;王金勝;張輝挺;王宏;宋其芳;黃建芳;鄧寧;;人源性EGFL6的重組表達及多克隆抗體制備研究[J];免疫學(xué)雜志;2013年06期

5 馬姝雯;王明明;;馬鈴薯淀粉廢水中高絮凝菌種的絮凝研究[J];食品工業(yè)科技;2014年04期

6 佘檀;汪有科;高志永;魏新光;董建國;;陜北黃土丘陵山地棗樹生物量模型[J];水土保持通報;2015年03期

7 何衡杰;郝麗;;腫瘤壞死因子α在超重者脂肪組織中的表達[J];中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè);2014年23期

8 呂成定;吳斌華;翁銳強;楊晶;鄧寧;;EGFL6基因沉默對人黑素瘤細胞增殖及侵襲的影響[J];腫瘤;2015年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 林靜;基于MCMC的貝葉斯生存分析理論及其在可靠性評估中的應(yīng)用[D];南京理工大學(xué);2008年

2 王春林;X染色體隱性遺傳性生長激素缺乏癥家系候選基因定位研究[D];浙江大學(xué);2012年

3 常亞萍;siRNA設(shè)計中若干關(guān)鍵問題的研究[D];吉林大學(xué);2013年

4 李效凱;有氧運動與飲食干預(yù)對不同F(xiàn)TOrs9939609基因型超重與肥胖男大學(xué)生的影響[D];華東師范大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘旭光;地基微波輻射計資料的質(zhì)量控制方法及其應(yīng)用研究[D];南京信息工程大學(xué);2011年

2 劉曉輝;君子蘭公園溝谷地不同植被下元素遷移對比分析[D];東北師范大學(xué);2006年

3 劉再斌;基于數(shù)據(jù)挖掘分類技術(shù)的煤層底板突水預(yù)測[D];煤炭科學(xué)研究總院;2008年

4 李翰麟;基于DSP的埋弧焊電源控制系統(tǒng)設(shè)計[D];西南交通大學(xué);2009年

5 聶向飛;奶牛泌乳曲線模型及昆明小鼠乳腺細胞凋亡與泌乳相關(guān)酶表達的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 徐冬冬;基于統(tǒng)計的人臉識別方法研究[D];江南大學(xué);2009年

7 王家立;電感位移傳感器及其信號線性化處理的研究[D];中國計量科學(xué)研究院;2010年

8 高婷婷;基于IEM的裸露隨機地表土壤水分反演研究[D];新疆大學(xué);2010年

9 吳慧俐;無限極公司產(chǎn)品銷售預(yù)測及營銷策略研究[D];華南理工大學(xué);2010年

10 曾潔美;數(shù)據(jù)缺失處理在“綠色礦山”中的應(yīng)用[D];安徽工業(yè)大學(xué);2012年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫長生,何揚舉;“，

本文編號：917252