發(fā)布時間：2017-09-20 16:11

  本文關(guān)鍵詞：小鼠CD200基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的:構(gòu)建攜帶小鼠CD200基因的重組腺病毒載體,并鑒定其在小鼠胰腺內(nèi)皮細胞(mile sven 1,MS1)中mCD200基因的表達情況。方法:mCD200基因亞克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒pYr-adshuttle-4,獲得重組質(zhì)粒pYr-ads-4-mCD200。從該重組質(zhì)粒上利用LR(attL×attR)特異性同源重組的方法,將mCD200表達框構(gòu)建至腺病毒骨架質(zhì)粒pAd/PL-DEST上,獲得的重組腺病毒質(zhì)粒經(jīng)PacⅠ酶切,轉(zhuǎn)染HEK293細胞,包裝成重組腺病毒rAd-4-mCD200,并用酶切和PCR等鑒定。采用TCID 50(tissue cell infectious dosage 50,TCID50)法測定重組腺病毒滴度。同時在HEK293細胞中進行病毒擴增,并感染小鼠內(nèi)皮細胞MS1,通過熒光顯微鏡、real-time PCR檢測MS1中小鼠CD200基因的表達。結(jié)果:PCR鑒定重組腺病毒證實重組腺病毒rAd-4-mCD200構(gòu)建成功;擴增后檢測病毒滴度約為109~1010pfu/ml;熒光顯微鏡及real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn)該重組腺病毒能在MS1細胞中高效的表達。結(jié)論:構(gòu)建的重組腺病毒rAd-4-mCD200在MS1細胞中成功表達mCD200基因,為下一步開展關(guān)于CD200基因免疫抑制調(diào)節(jié)等相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗學(xué)院;寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院寧夏人類干細胞研究所;
【關(guān)鍵詞】： 腺病毒載體 CD 免疫調(diào)節(jié)
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:30960176) 寧夏自然科學(xué)基金資助項目(編號:NZ11262)
【分類號】：R346
【正文快照】： CD200也稱OX-2、MRCOX2、MOX2,屬于白細胞分化抗原,由McMaster和Williams[1]于1979年發(fā)現(xiàn),與其受體CD200R均屬于免疫球蛋白超家族,廣泛表達于胸腺細胞、B細胞、活化的T細胞、血管內(nèi)皮細胞、濾泡狀樹突細胞及外周神經(jīng)元[2-4]。CD200的受體(CD200R)表達在髓樣細胞上,是一種細胞

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本文編號：889069