發(fā)布時間：2017-09-14 00:29

  本文關(guān)鍵詞：人類神經(jīng)管畸形患者攜帶編碼基因TCOF1稀有變異A491G影響核糖體生物合成

  更多相關(guān)文章： 神經(jīng)管畸形 無腦兒 TCOF1 核糖體生物合成

【摘要】：目的:功能性破壞性稀有變異是指某一基因突變可導(dǎo)致該基因功能發(fā)生改變,同時它在個人中的發(fā)生頻率是非常低的。稀有變異在復(fù)雜疾病的研究中扮演著重要的角色。神經(jīng)管畸形是一種多因素多基因的先天性復(fù)雜疾病,表現(xiàn)包括無腦兒、脊柱裂、腦膨出等。Treacle為一種核仁蛋白,參與核糖體DNA的轉(zhuǎn)錄、核糖體生物合成。在其編碼基因Tcof1基因敲除小鼠模型中發(fā)現(xiàn)顱面發(fā)育畸形和無腦兒表型。本研究的目的是在人類神經(jīng)管畸形是否存在功能破壞性TCOF1基因稀有變異。方法:本研究針對來自中國北方人群NTD樣本及對照樣本胚胎組織提取DNA進(jìn)行TCOF1的靶向基因組測序。將測序所得的稀有變異與Genome1000、db SNP、NHLBI Exome Sequencing Project(ESP)進(jìn)行比對,稀有變異進(jìn)行生物信息學(xué)分析,和通過比對稀有變異對氨基酸的影響和稀有變異位點(diǎn)保守性分型進(jìn)行生化進(jìn)化特征分析,篩選TCOF1基因突變位點(diǎn)。Origene公司訂購TCOF1基因野生型和突變型質(zhì)粒。通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染構(gòu)建細(xì)胞模型,觀察野生型和突變型TCOF1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率,檢測野生型和突變型的m RNA水平及Treacle蛋白表達(dá)。利用免疫熒光檢測野生型和突變型質(zhì)粒對核仁分裂的影響是否存在差異。利用real-time PCR方法比較野生型和突變型RNA45S5表達(dá)變化,用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0分析結(jié)果。利用ALLPrep DNA/RNA/Protein Mini試劑盒和考馬斯亮藍(lán)方法檢測在以DNA為參照下野生型和突變型總蛋白的變化。結(jié)果:(1)21.2%人類NTD患者攜帶TCOF1基因新發(fā)稀有變異,2.5%攜帶錯義突變;(2)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0分析結(jié)果TCOF1基因稀有變異富集在NTDs的無腦兒表型;(3)TCOF1基因A491G變異影響其蛋白和m RNA的表達(dá),進(jìn)而導(dǎo)致核仁分裂現(xiàn)象存在差異;(4)TCOF1 A491G變異影響RNA45S5的合成,從而影響總蛋白的合成。結(jié)論:人類NTD患者富集TCOF1基因稀有變異。TCOF1基因稀有變異富集在無腦兒表型。TCOF1 A491G可能是導(dǎo)致NTD合并顱面部畸形的致病突變。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)管畸形 無腦兒 TCOF1 核糖體生物合成
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R394
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法12-31
• 1.1 人組織樣本12
• 1.2 主要試劑及儀器12-15
• 1.3 主要溶液的配制15-19
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法19-31
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-41
• 2.1 NTDs患者顯著富集TCOF1 基因稀有變異31
• 2.2 TCOF1 基因稀有變異富集在NTDs的無腦兒表型31-36
• 2.3 TCOF1 基因稀有變異位點(diǎn)的細(xì)胞水平功能驗(yàn)證36-41
• 3 討論41-44
• 4 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 綜述48-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 致謝56-57
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果57-58
• 個人簡介58

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本文編號：846800