本文關(guān)鍵詞：人精子肌動(dòng)蛋白樣蛋白7a蛋白在大腸桿菌系統(tǒng)的表達(dá)純化及多克隆抗體制備

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【摘要】：目的在大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)并純化人精子肌動(dòng)蛋白樣蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制備兔抗ACTL7a多克隆抗體。方法構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),篩選陽(yáng)性重組菌,IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),通過(guò)鎳離子金屬螯合樹(shù)脂和谷胱甘肽瓊脂糖凝膠4B樹(shù)脂兩次親和純化和分子篩分離目的蛋白;以表達(dá)的ACTL7a(1-70)蛋白免疫新西蘭大白兔,制備抗ACTL7a的多克隆抗體。ELISA檢測(cè)抗體效價(jià),Western blot法鑒定抗體特異性,免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)ACTL7a在曲精小管細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)IPTG誘導(dǎo),在大腸桿菌中表達(dá)出目的蛋白ACTL7a(1-70),純化后免疫新西蘭大白兔,成功獲得抗血清。血清效價(jià)達(dá)到1:160000以上,且具有良好的特異性。結(jié)論成功構(gòu)建了ACTL7a基因的原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)純化獲得高純度的目的蛋白;制備出兔抗ACTL7a抗體,效價(jià)及特異性均良好。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： ACTLa 原核表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2012BAI31B08) 國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)基金(2060204)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 精子發(fā)生是生物體內(nèi)非常復(fù)雜的過(guò)程之一。小鼠中大約4%的基因組是特異表達(dá)在生殖細(xì)胞中,其中大多數(shù)是在減數(shù)分裂后具有活性[1]。通過(guò)cDNA芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)有101個(gè)基因可能涉及到調(diào)節(jié)精子發(fā)生過(guò)程[2]。1 652個(gè)基因在減數(shù)分裂開(kāi)始時(shí)的轉(zhuǎn)錄豐度明顯增加,351(20%)個(gè)基因只在雄性生殖

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 付俊;繆時(shí)英;;小鼠睪丸曲細(xì)精管生精上皮的分離及形態(tài)觀察[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2011年06期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 吳曉e，

本文編號(hào)：842197