本文關(guān)鍵詞：豬Toll樣受體7基因人工miRNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選

  更多相關(guān)文章： Toll樣受體基因 人工miRNA RNA干擾 篩選

【摘要】：目的構(gòu)建豬Toll樣受體7(TLR7)基因的人工miRNA(amiRNA)特異性表達(dá)載體,篩選有效amiRNA。方法 RT-PCR擴(kuò)增豬TLR7基因的1984～2648 bp序列,構(gòu)建融合表達(dá)載體pTLR7-EGFP。設(shè)計(jì)針對豬TLR7的5對amiRNA,構(gòu)建重組干擾質(zhì)粒pcDNA5-miRTLR7。將pcDNA5-miRTLR7和pTLR7-EGFP共轉(zhuǎn)染NIH-3T3細(xì)胞,通過RT-PCR檢測amiTLR7的表達(dá),以熒光顯微鏡觀察和流式細(xì)胞術(shù)分析干擾效率。結(jié)果 5個(gè)amiTLR7都成功表達(dá),且均能沉默NIH-3T3細(xì)胞中TLR7基因的表達(dá),抑制效率為36.99%到97.28%,其中amiTLR7-3效果最佳。結(jié)論成功構(gòu)建了針對豬TLR7基因的amiRNA表達(dá)質(zhì)粒,篩選出了沉默豬TLR7基因的最佳干擾序列。
【作者單位】： 揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院 禽類預(yù)防醫(yī)學(xué)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： Toll樣受體基因 人工miRNA RNA干擾 篩選
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31001052) 教育部創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)基金(IRT0978) 江蘇省優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(2010年)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： Toll樣受體家族(Toll-like receptors,TLRs)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)跨膜受體,可識(shí)別病原相關(guān)分子模式,引發(fā)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,導(dǎo)致炎癥介質(zhì)的釋放,在天然免疫防御中起重要作用。迄今為止,在人類有11種、小鼠有12種、豬有10種TLRs分子已經(jīng)被鑒定確實(shí)[1-2]。其中TLR7可識(shí)

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李勁濤;楊軍;張秀麗;譚興;;RNAi最新研究概況[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2007年11期

2 段鳳云;房永祥;陳國華;王生富;何延華;景志忠;;豬Toll樣受體7基因的克隆及序列分析[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年06期

3 楊林立;李瑞梅;潘新華;錢e，

本文編號(hào)：836388