本文關鍵詞：抗EGFR治療提高復發(fā)食管癌放療療效的動物模型實驗

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【摘要】：背景在我國,食管癌是高發(fā)惡性腫瘤,發(fā)病率列第三位,死亡率列第四位。食管癌患者確診時,大多已不能通過手術達到根治治療,放化療綜合治療成為食管癌無法手術患者的重要治療辦法。但即使已行放化療,食管癌局部復發(fā)的概率為3 0-4 0%。復發(fā)后食管癌的治療成為再程治療的難題,再治療效果差,治療風險大。研究認為是食管癌復發(fā)治療效果不佳的原因可能為:(1)食管組織在已經接受較高照射劑量后,再行局部復發(fā)區(qū)域的放療,正常組織耐受性差,放療劑量無法提高;(2)復發(fā)食管癌腫瘤內區(qū)域乏氧程度較前增高,對再次放療抵抗程度增加。研究證明,乏氧區(qū)域的腫瘤EGFR基因也出現(xiàn)高表達,所以利用EGFR靶向治療與放療的結合,有可能成為治療復發(fā)性食管癌的有效治療方法。尼妥珠單抗可用來治療EGFR表達陽性腫瘤的分子靶向藥物,目前臨床實驗證實可與放療結合治療食管癌,是目前國際唯一獲批治療食管癌的單抗藥物。目的通過建立動物食管癌復發(fā)模型,采用尼妥珠單抗加放療對復發(fā)食管癌模型進行治療,觀察抑制腫瘤生長的情況,確定探討抗EGFR治療聯(lián)合放療對于復發(fā)食管癌的療效;應用細胞流式技術,免疫組化技術,Western Blot等技術,探討不同食管癌復發(fā)模型乏氧狀態(tài)和EGFR表達的關系,分析EGFR抑制劑抗腫瘤的作用機制。方法Western Blot實驗檢測常氧和乏氧培養(yǎng)下加或不加尼妥珠單抗EC10 9食管鱗癌細胞中EGFR、p-EGFR和HIF-1α的蛋白表達水平。細胞流式技術檢測EC109細胞不同處理方式后的細胞周期和凋亡狀態(tài)。構建兩種食管癌復發(fā)腫瘤模型:(1)裸鼠種植腫瘤前24小時行X線照射種植部位10Gy;(2)常規(guī)建立裸鼠皮下移植瘤后,照射20Gy待腫瘤再生長,并以常規(guī)裸鼠移植瘤模型進行對照。各組裸鼠成瘤并達到入組標準后,每種模型均分為空白對照組、單純放療組、尼妥珠單抗組以及尼妥珠單抗聯(lián)合放療組4種組,觀察測量腫瘤生長曲線。同時采用免疫組化染色分析不同腫瘤模型HIF-1α和EGFR表達情況。采用配對T檢驗,單因素方差分析進行統(tǒng)計分析。P0.05為認為差異存在統(tǒng)計學意義。結果Western Blot分析顯示乏氧狀態(tài)下EC109細胞的HIF-1α、EGFR高表達,應用尼妥珠單抗可下調p-EGFR的表達。流式細胞分析顯示尼妥珠單抗聯(lián)合放療組將細胞主要阻滯在細胞周期G2、細胞凋亡比率最高。腫瘤組織免疫組化染色證實復發(fā)模型腫瘤HIF-1α表達增加,細胞膜上EGFR的表達亦明顯增高。腫瘤生長延遲實驗證實,放射治療均可抑制腫瘤生長,單純尼妥珠單抗治療與空白對照組沒有明顯差異;復發(fā)食管癌腫瘤生長速度與常規(guī)模型相比生長較慢,尼妥珠單抗聯(lián)合放療治療組腫瘤生長明顯延遲,P0.0 5。結論細胞實驗證實,食管癌細胞乏氧程度增加,EGFR表達程度亦增加,而尼妥珠單抗可下調p-EGFR表達。對于EGFR高表達的復發(fā)性食管腫瘤,尼妥珠單抗可以提高放射治療敏感性,明顯改善復發(fā)性食管癌的放療療效。本實驗為臨床上復發(fā)食管癌治療提供新思路,為尼妥珠單抗用于提高復發(fā)性食管癌放療療效的作用,提供了理論和實驗依據(jù)。
【關鍵詞】：食管癌 尼妥珠單抗 EGFR 乏氧 放射治療
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1;R-332
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 主要符號表11-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 材料與方法14-24
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 細胞及動物14
• 2.1.2 主要實驗器材與試劑14-15
• 2.2 實驗方法15-22
• 2.3 統(tǒng)計學分析22-24
• 第三章 結果24-30
• 3.1 尼妥珠單抗對EC109細胞周期的影響24
• 3.2 尼妥珠單抗對EC109細胞凋亡的影響24-27
• 3.3 Western Blot結果27-28
• 3.4 病理結果28
• 3.5 腫瘤生長延遲實驗28-30
• 第四章 討論30-36
• 4.1 EGFR抑制劑與食管癌放射治療30-31
• 4.2 EGFR的表達與腫瘤細胞放射敏感性的關系31
• 4.3 EGFR抑制劑提高放療療效的機制探討31-33
• 4.4 腫瘤的乏氧與放射治療的抵抗33
• 4.5 腫瘤乏氧與EGFR過表達的關系33-35
• 4.6 臨床應用價值35-36
• 第五章 結論36-38
• 參考文獻38-44
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文44-45
• 致謝45

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本文編號：823607