本文關(guān)鍵詞：雙熒光素酶標(biāo)記丙型肝炎病毒亞基因組復(fù)制子細(xì)胞模型的建立

  更多相關(guān)文章： 丙型肝炎病毒 熒光素酶類 螢火蟲 Gaussia熒光素酶 細(xì)胞模型 復(fù)制子

【摘要】：目的構(gòu)建雙熒光素酶標(biāo)記丙型肝炎病毒(HCV)亞基因組復(fù)制子細(xì)胞模型,為HCV研究提供有效工具。方法通過(guò)單克隆篩選及慢病毒感染構(gòu)建雙熒光素酶標(biāo)記的HCV亞基因組復(fù)制子細(xì)胞模型(HCV Fluc-UbiGluc)。利用熒光素酶檢測(cè)、Western印跡檢測(cè)鑒定細(xì)胞模型,利用IFN-α對(duì)HCV抗病毒效果評(píng)價(jià)驗(yàn)證細(xì)胞模型的有效性。結(jié)果篩選所得HCV亞基因組細(xì)胞克隆檢測(cè)到熒光素酶活性,Western印跡檢測(cè)到HCV NS5A蛋白表達(dá)。NS3/4A對(duì)黃色熒光蛋白(YFP)標(biāo)記的MAVS(YFP-MAVS)切割作用使亞細(xì)胞定位發(fā)生轉(zhuǎn)移。IFN-α處理后熒光素酶活性、HCV蛋白表達(dá)水平明顯降低。結(jié)論該模型采用螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因指示HCV亞基因組在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制水平,Gaussia熒光素酶指示細(xì)胞的生長(zhǎng)數(shù)量,能準(zhǔn)確反映候選藥物對(duì)HCV復(fù)制水平的影響,并有效排除藥物的細(xì)胞毒性干擾,具有操作簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn),在抗病毒藥物高通量篩選、HCV致病機(jī)制等研究方面具有一定的價(jià)值。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所;
【關(guān)鍵詞】： 丙型肝炎病毒 熒光素酶類 螢火蟲 Gaussia熒光素酶 細(xì)胞模型 復(fù)制子
【基金】：北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(7112104,7122136)
【分類號(hào)】：R373.21
【正文快照】： 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染率占全世界人口的1%~2%,我國(guó)的感染率達(dá)到3.2%,其中70%~80%的感染者轉(zhuǎn)為慢性,其轉(zhuǎn)歸與肝硬化和肝細(xì)胞癌有密切關(guān)系[1,2]。丙型病毒性肝炎具有高流行性、病程隱匿性和長(zhǎng)期感染導(dǎo)致預(yù)后不良等特性,因此成為一個(gè)嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)和社會(huì)經(jīng)濟(jì)學(xué)

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8 朱s，

本文編號(hào)：784697