發(fā)布時(shí)間：2017-09-02 16:21

  本文關(guān)鍵詞：cnksr2基因干擾腺病毒的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：構(gòu)建小鼠cnksr2基因干擾腺病毒質(zhì)粒載體并加以鑒定.根據(jù)小鼠cnksr2基因序列設(shè)計(jì)cnksr2干擾序列引物,定向克隆至穿梭載體pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位點(diǎn),PmeⅠ酶切線性化的pShuttle-H1-Sicnksr2干擾質(zhì)粒,并與腺病毒載體(pAdEasy-1質(zhì)粒)共同轉(zhuǎn)化E.coli BJ5183感受態(tài)細(xì)菌,產(chǎn)生重組腺病毒載體.用PacⅠ酶切線性化的回收質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞,包裝腺病毒顆粒,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病理性變化(Cell pathological effect,CPE),用TCID50法測(cè)定病毒顆粒的濃度,并初步觀察病毒感染PC12細(xì)胞對(duì)目的基因的干擾效率.經(jīng)酶切鑒定、測(cè)序證實(shí)成功構(gòu)建小鼠cnksr2基因干擾腺病毒載體.包裝的腺病毒濃縮懸液滴度為3.98×107PFU/mL.cnksr2在大鼠及小鼠中具有保守性,該病毒能在大鼠來(lái)源的PC12細(xì)胞中成功表達(dá),并且對(duì)cnksr2基因干擾效率達(dá)50%以上.結(jié)論:成功構(gòu)建了小鼠cnksr2基因的干擾腺病毒載體.
【作者單位】： 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院 江蘇省醫(yī)學(xué)分子技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 江蘇省分子醫(yī)學(xué)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： cnksr基因 干擾 腺病毒
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31171306) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK2011568)
【分類(lèi)號(hào)】：R373
【正文快照】： CNKSR2(Connector enhancer of kinase suppressor of ras 2)是一個(gè)具有多個(gè)結(jié)構(gòu)域的接頭蛋白,由cnk-sr2基因編碼.Therrien等人首先在果蠅中發(fā)現(xiàn),cnksr編碼一個(gè)新的參與Ras信號(hào)通路調(diào)節(jié)的蛋白CNK[1].隨后,Nagase等人證實(shí)哺乳動(dòng)物cnksr同源序列之一cnksr2在人腦組織中特異性高

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本文編號(hào)：779607