本文關鍵詞：cnksr2基因干擾腺病毒的構建及鑒定

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【摘要】：構建小鼠cnksr2基因干擾腺病毒質(zhì)粒載體并加以鑒定.根據(jù)小鼠cnksr2基因序列設計cnksr2干擾序列引物,定向克隆至穿梭載體pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位點,PmeⅠ酶切線性化的pShuttle-H1-Sicnksr2干擾質(zhì)粒,并與腺病毒載體(pAdEasy-1質(zhì)粒)共同轉(zhuǎn)化E.coli BJ5183感受態(tài)細菌,產(chǎn)生重組腺病毒載體.用PacⅠ酶切線性化的回收質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293A細胞,包裝腺病毒顆粒,在倒置顯微鏡下觀察細胞病理性變化(Cell pathological effect,CPE),用TCID50法測定病毒顆粒的濃度,并初步觀察病毒感染PC12細胞對目的基因的干擾效率.經(jīng)酶切鑒定、測序證實成功構建小鼠cnksr2基因干擾腺病毒載體.包裝的腺病毒濃縮懸液滴度為3.98×107PFU/mL.cnksr2在大鼠及小鼠中具有保守性,該病毒能在大鼠來源的PC12細胞中成功表達,并且對cnksr2基因干擾效率達50%以上.結論:成功構建了小鼠cnksr2基因的干擾腺病毒載體.
【作者單位】： 南京大學醫(yī)學院 江蘇省醫(yī)學分子技術重點實驗室;南京師范大學生命科學學院 江蘇省分子醫(yī)學生物技術重點實驗室;
【關鍵詞】： cnksr基因 干擾 腺病毒
【基金】：國家自然科學基金(31171306) 江蘇省自然科學基金(BK2011568)
【分類號】：R373
【正文快照】： CNKSR2(Connector enhancer of kinase suppressor of ras 2)是一個具有多個結構域的接頭蛋白,由cnk-sr2基因編碼.Therrien等人首先在果蠅中發(fā)現(xiàn),cnksr編碼一個新的參與Ras信號通路調(diào)節(jié)的蛋白CNK[1].隨后,Nagase等人證實哺乳動物cnksr同源序列之一cnksr2在人腦組織中特異性高

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本文編號：779607