本文關(guān)鍵詞：復(fù)制子熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒pSVK-luc的構(gòu)建與應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 熒光素酶基因 復(fù)制子載體 體內(nèi)外表達(dá) 活體成像

【摘要】：目的為研究復(fù)制子DNA疫苗在生物活體內(nèi)的表達(dá)情況,構(gòu)建含有熒光素酶報(bào)告基因的復(fù)制子表達(dá)質(zhì)粒pSVK-luc。方法 PCR擴(kuò)增熒光素酶報(bào)告基因,克隆入DNA復(fù)制子載體pSVK,酶切鑒定和測(cè)序分析篩選陽性重組質(zhì)粒pSVK-luc;化學(xué)法轉(zhuǎn)染人胚腎293T細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光法檢測(cè)熒光素酶基因在293T細(xì)胞中的表達(dá);利用基因電穿孔導(dǎo)入儀遞送重組質(zhì)粒至BALB/c小鼠股四頭肌,活體成像儀動(dòng)態(tài)觀測(cè)熒光素酶基因在小鼠體內(nèi)的表達(dá)。結(jié)果 pSVK-luc經(jīng)相應(yīng)酶切和測(cè)序鑒定,與預(yù)期設(shè)計(jì)完全一致。流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光檢測(cè)均可見熒光素酶基因表達(dá);同時(shí)活體成像儀也能檢測(cè)到該基因在小鼠體內(nèi)的表達(dá)。結(jié)論 pSVK-luc表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建成功將為復(fù)制子DNA疫苗體內(nèi)作用機(jī)制研究和體內(nèi)電穿孔遞送條件的優(yōu)化奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 熒光素酶基因 復(fù)制子載體 體內(nèi)外表達(dá) 活體成像
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31100655)
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： )DNA疫苗由于兼具預(yù)防和治療雙重功效,特別是能夠誘導(dǎo)抗原特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(cytotoxic tlymphocyte,CTL)活性,被認(rèn)為是一種具有良好應(yīng)用前景的免疫治療方法,對(duì)研究治療重大慢性疾病的新型治療性疫苗極為有利[1-2]。然而近期研究表明DNA疫苗在大動(dòng)物模型和人體試驗(yàn)中治療

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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2 余云舟;孫志偉;劉志剛;俞煒源;;基于DNA的Semliki森林病毒復(fù)制子載體體內(nèi)外高水平表達(dá)外源基因[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2006年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 余云舟;孫志偉;俞煒源;;炭疽保護(hù)性抗原第四結(jié)構(gòu)域基因在重組SFV復(fù)制子載體中的表達(dá)[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2006年06期

3 劉國棟;劉荷中;于繼云;郭炳冉;;復(fù)制型DNA疫苗的研究進(jìn)展[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2006年06期

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8 馬堯;李娜;余云舟;孫志偉;俞煒源;;重組PA4復(fù)制子病毒顆粒疫苗免疫原性的分析[J];生物技術(shù)通訊;2012年01期

9 付延軍;金寧一;金洪濤;李臻;辛蘇文;李萍;韓貞珍;李太元;;DNA表達(dá)載體構(gòu)建及HIV多表位核酸疫苗的設(shè)計(jì)與表達(dá)[J];中國生物制品學(xué)雜志;2007年04期

10 余松濤;楊應(yīng)斌;史春夢(mèng);陳陵;湯旭東;黎川;師紅磊;李長珠;李寧;王國珍;吳玉云;房殿春;楊仕明;;端粒酶hTERT亞單位啟動(dòng)子靶向性慢病毒對(duì)腫瘤活體實(shí)時(shí)顯像的實(shí)驗(yàn)研究[J];實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志;2010年05期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 王玨;具有“人源性微環(huán)境”的乳腺癌原位和轉(zhuǎn)移小鼠模型的建立和研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

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4 張亮;新型可復(fù)制型抗腫瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的抑瘤活性及免疫學(xué)機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

5 任曉慧;RNA復(fù)制子對(duì)基因表達(dá)的促進(jìn)作用及動(dòng)物促生長方法的探討[D];吉林大學(xué);2007年

6 侯賀禮;PI3K抑制劑和輻射對(duì)細(xì)胞命運(yùn)的影響研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2011年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 余云舟,孫志偉,俞煒源;基于DNA和RNA的雙功能Semliki森林病毒復(fù)制子載體的構(gòu)建[J];生物工程學(xué)報(bào);2005年05期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 梁雪松;連建奇;周永興;聶青和;郝春秋;;IRES特異性IRNA對(duì)HCV IRES啟動(dòng)蛋白翻譯細(xì)胞內(nèi)抑制作用[J];世界華人消化雜志;2003年02期

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3 楊滔;趙俊琴;劉水平;李洪濤;李建華;;結(jié)構(gòu)域Ⅰ缺失的丙型肝炎病毒5′NCR調(diào)控?zé)晒馑孛富虻谋磉_(dá)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年05期

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7 伏爽,程康,王申五,馬大龍,王德炳;Tet-On基因表達(dá)系統(tǒng)定量調(diào)節(jié)熒光素酶基因在CHO細(xì)胞中的表達(dá)[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1998年06期

8 魏紅山;劉志英;劉順愛;董慶鳴;郭晶晶;張四平;蔣為;成軍;;應(yīng)用干擾RNA技術(shù)抑制乙型肝炎病毒抗原的體外表達(dá)[J];中華傳染病雜志;2007年03期

9 徐松琳;金拓;;新型聚乙烯亞胺衍生物體內(nèi)轉(zhuǎn)染活性的研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年12期

10 張海燕;李艷;王U，

本文編號(hào)：762381