本文關鍵詞：復制子熒光素酶表達質(zhì)粒pSVK-luc的構(gòu)建與應用

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【摘要】：目的為研究復制子DNA疫苗在生物活體內(nèi)的表達情況,構(gòu)建含有熒光素酶報告基因的復制子表達質(zhì)粒pSVK-luc。方法 PCR擴增熒光素酶報告基因,克隆入DNA復制子載體pSVK,酶切鑒定和測序分析篩選陽性重組質(zhì)粒pSVK-luc;化學法轉(zhuǎn)染人胚腎293T細胞,流式細胞術(shù)和免疫熒光法檢測熒光素酶基因在293T細胞中的表達;利用基因電穿孔導入儀遞送重組質(zhì)粒至BALB/c小鼠股四頭肌,活體成像儀動態(tài)觀測熒光素酶基因在小鼠體內(nèi)的表達。結(jié)果 pSVK-luc經(jīng)相應酶切和測序鑒定,與預期設計完全一致。流式細胞術(shù)和免疫熒光檢測均可見熒光素酶基因表達;同時活體成像儀也能檢測到該基因在小鼠體內(nèi)的表達。結(jié)論 pSVK-luc表達質(zhì)粒的構(gòu)建成功將為復制子DNA疫苗體內(nèi)作用機制研究和體內(nèi)電穿孔遞送條件的優(yōu)化奠定實驗基礎。
【作者單位】： 新疆大學生命科學與技術(shù)學院;軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所;
【關鍵詞】： 熒光素酶基因 復制子載體 體內(nèi)外表達 活體成像
【基金】：國家自然科學基金(31100655)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： )DNA疫苗由于兼具預防和治療雙重功效,特別是能夠誘導抗原特異性細胞毒T淋巴細胞(cytotoxic tlymphocyte,CTL)活性,被認為是一種具有良好應用前景的免疫治療方法,對研究治療重大慢性疾病的新型治療性疫苗極為有利[1-2]。然而近期研究表明DNA疫苗在大動物模型和人體試驗中治療

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張亮;李瀟瀟;韓剛;董金凱;閻瑾琦;肖毅;于繼云;;不同方式遞送質(zhì)粒DNA誘導體內(nèi)表達效果的實驗研究[J];軍醫(yī)進修學院學報;2010年01期

2 余云舟;孫志偉;劉志剛;俞煒源;;基于DNA的Semliki森林病毒復制子載體體內(nèi)外高水平表達外源基因[J];生物化學與生物物理進展;2006年01期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張亮;閻瑾琦;王越;肖毅;高昆;董金凱;王博;于繼云;;可復制型抗腫瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的構(gòu)建及體內(nèi)外表達[J];南方醫(yī)科大學學報;2011年06期

2 余云舟;孫志偉;俞煒源;;炭疽保護性抗原第四結(jié)構(gòu)域基因在重組SFV復制子載體中的表達[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2006年06期

3 劉國棟;劉荷中;于繼云;郭炳冉;;復制型DNA疫苗的研究進展[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2006年06期

4 任曉慧;羅胡英;劉松財;張明軍;歐陽松應;張永亮;;普通質(zhì)粒載體與Semliki森林病毒復制子載體表達GHRH的比較[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報;2008年02期

5 李珂;趙光;高春芳;何偉華;;小動物活體成像技術(shù)的應用進展[J];實用醫(yī)藥雜志;2012年01期

6 余云舟;孫志偉;王雙;俞煒源;;A型肉毒毒素受體結(jié)合區(qū)Hc在重組SFV復制子載體中的表達[J];生物工程學報;2008年01期

7 李傳寶;華甜;金海明;杜宏武;;電激和普魯卡因增強DNA導入哺乳動物活體效率[J];生物技術(shù);2011年06期

8 馬堯;李娜;余云舟;孫志偉;俞煒源;;重組PA4復制子病毒顆粒疫苗免疫原性的分析[J];生物技術(shù)通訊;2012年01期

9 付延軍;金寧一;金洪濤;李臻;辛蘇文;李萍;韓貞珍;李太元;;DNA表達載體構(gòu)建及HIV多表位核酸疫苗的設計與表達[J];中國生物制品學雜志;2007年04期

10 余松濤;楊應斌;史春夢;陳陵;湯旭東;黎川;師紅磊;李長珠;李寧;王國珍;吳玉云;房殿春;楊仕明;;端粒酶hTERT亞單位啟動子靶向性慢病毒對腫瘤活體實時顯像的實驗研究[J];實用臨床醫(yī)藥雜志;2010年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王曉敏;閆明霞;梁琳慧;李金枝;朱淼鑫;孔韓衛(wèi);趙方瑜;吳一遷;姚明;;GFP和Luc雙標技術(shù)在小鼠腫瘤模型建立中的應用[A];實驗動物與藥理學、毒理學研究學術(shù)交流會論文匯編[C];2009年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 王玨;具有“人源性微環(huán)境”的乳腺癌原位和轉(zhuǎn)移小鼠模型的建立和研究[D];南京醫(yī)科大學;2010年

2 顏汝平;負載腫瘤抗原的DC疫苗體內(nèi)外誘導的特異性抗膀胱癌效應研究[D];昆明醫(yī)學院;2011年

3 夏添松;人源性乳腺癌骨轉(zhuǎn)移小鼠模型的建立和應用[D];南京醫(yī)科大學;2011年

4 張亮;新型可復制型抗腫瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的抑瘤活性及免疫學機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2011年

5 任曉慧;RNA復制子對基因表達的促進作用及動物促生長方法的探討[D];吉林大學;2007年

6 侯賀禮;PI3K抑制劑和輻射對細胞命運的影響研究[D];中國科學技術(shù)大學;2011年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 余云舟,孫志偉,俞煒源;基于DNA和RNA的雙功能Semliki森林病毒復制子載體的構(gòu)建[J];生物工程學報;2005年05期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 梁雪松;連建奇;周永興;聶青和;郝春秋;;IRES特異性IRNA對HCV IRES啟動蛋白翻譯細胞內(nèi)抑制作用[J];世界華人消化雜志;2003年02期

2 黃鶯;邵煒;賈麗麗;俞煒源;俞永新;;日本腦炎病毒(JEV)復制子表達載體的構(gòu)建及其鑒定[J];病毒學報;2007年01期

3 楊滔;趙俊琴;劉水平;李洪濤;李建華;;結(jié)構(gòu)域Ⅰ缺失的丙型肝炎病毒5′NCR調(diào)控熒光素酶基因的表達[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2007年05期

4 唐麗;朱武洋;付士紅;何英;王志玉;梁國棟;;nsP2-726Pro定點誘變對辛德畢斯病毒XJ-160復制子載體特性的影響[J];病毒學報;2010年02期

5 黃鶯;劉珊;楊鵬;王超;杜韞;孫志偉;俞煒源;;日本腦炎病毒C蛋白對其復制子載體自主復制活性的影響[J];生物工程學報;2010年08期

6 連海;;辛德畢斯病毒載體的研究進展[J];中國生物制品學雜志;2010年12期

7 伏爽,程康,王申五,馬大龍,王德炳;Tet-On基因表達系統(tǒng)定量調(diào)節(jié)熒光素酶基因在CHO細胞中的表達[J];北京醫(yī)科大學學報;1998年06期

8 魏紅山;劉志英;劉順愛;董慶鳴;郭晶晶;張四平;蔣為;成軍;;應用干擾RNA技術(shù)抑制乙型肝炎病毒抗原的體外表達[J];中華傳染病雜志;2007年03期

9 徐松琳;金拓;;新型聚乙烯亞胺衍生物體內(nèi)轉(zhuǎn)染活性的研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2008年12期

10 張海燕;李艷;王U，

本文編號：762381