本文關(guān)鍵詞：弓形蟲肌動(dòng)蛋白表達(dá)及其抗血清制備

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【摘要】：目的體外制備弓形蟲肌動(dòng)蛋白(actin)及其多克隆抗體。方法以弓形蟲cDNA鏈為模板,PCR擴(kuò)增actin基因,亞克隆至pET30a載體,轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌BL21中;異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)actin-His6蛋白;用純化的蛋白加免疫佐劑免疫SD大鼠,收集抗血清,制備多克隆抗體,抗體親和純化柱純化并分析抗體的效價(jià)。結(jié)果 actin基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳,結(jié)果顯示,在1 000 bp附近有一條帶,與目的基因(actin cDNA長度為1 131 bp)大小相符;actin/pET30a重組質(zhì)粒經(jīng)BamHI和XhoI雙酶切,1.0%瓊脂糖凝膠電泳分析酶切產(chǎn)物,在1 000和5 000 bp附近可見條帶;actin-His6蛋白在3～4 h時(shí)表達(dá)量達(dá)到峰值;蛋白可溶性分析顯示,actin-His6蛋白主要以包涵體的形式存在;獲得了抗actin-His6蛋白的大鼠源性抗血清。結(jié)論弓形蟲actin蛋白在原核系統(tǒng)中得到了表達(dá),用該蛋白免疫動(dòng)物后獲得了抗血清。
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 弓形蟲 肌動(dòng)蛋白 蛋白表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(112102310209) 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金(100777)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii,T.gondii)是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,可感染幾乎所有的有核細(xì)胞,由其引發(fā)的弓形蟲病(toxoplasmosis)在全世界范圍內(nèi)廣泛流行,給人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展造成了較大的損失[1]。到目前為止弓形蟲入侵宿主細(xì)胞的分子機(jī)制尚未完全闡明,有研究結(jié)果表明,

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本文編號(hào)：762085