本文關鍵詞：攜帶標記基因的慢病毒載體轉染人臍帶華通膠間充質干細胞的實驗研究

  更多相關文章： 間質干細胞 流式細胞術 慢病毒屬 遺傳載體 基因療法 轉染 細胞增殖

【摘要】：目的探討含有增強型綠色熒光蛋白標記基因的慢病毒(Lentivirus-EGFP)體外轉染人臍帶華通膠間充質干細胞(HUWMSCs)的最佳方案及其對細胞增殖活性的影響。方法設計A、B、C、D共4種轉染方案,分別以1、10、100的感染復數(shù)(MOI)轉染體外培養(yǎng)的HUWMSCs,熒光顯微鏡及流式細胞儀檢測各組熒光表達強度及轉染效率,MTT法檢測細胞增殖倍數(shù)。結果轉染4 d后所有實驗組轉染率在10.6%~87.3%,并與MOI值存在量效關系,聚凝胺(5 mg/L)可顯著增加病毒轉染效率(P0.05)。MTT實驗結果顯示,與對照組比較,不同轉染方案細胞增殖存在顯著差異(P0.001)。A方案MOI=10組及B方案MOI=10組細胞增殖情況較其他組好。結論B方案MOI=10實驗組為最佳轉染方案。Lentivirus-EGFP能高效轉染HUWMSCs且在2周內穩(wěn)定表達轉染基因,是一種安全、有效的基因轉移載體。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學海軍臨床醫(yī)學院;中國人民解放軍海軍總醫(yī)院心臟中心;
【關鍵詞】： 間質干細胞 流式細胞術 慢病毒屬 遺傳載體 基因療法 轉染 細胞增殖
【基金】：國家自然科學基金面上項目(項目編號:81170094)
【分類號】：R341
【正文快照】： 干細胞工程研究通常需要在體外對干細胞進行基因修飾與改造,目前用于哺乳動物細胞基因修飾的工具主要包括質粒載體、腺病毒載體、反轉錄病毒載體和慢病毒(Lentivirus)載體等。其中,慢病毒載體是以人類免疫缺陷型病毒(HIV)為基礎發(fā)展起來的基因修飾載體,它對分裂細胞和非分裂

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本文編號：748574