發(fā)布時間：2017-08-14 16:43

  本文關(guān)鍵詞：ARIP1及ARIP2在Neuro-2a細胞中的表達及作用比較

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【摘要】：激活素(Activin)屬于轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族成員,具有多種生物學(xué)效應(yīng)。激活素受體相互作用蛋白(Activin Receptor-Interacting Protein,ARIP)是細胞內(nèi)激活素信號傳導(dǎo)蛋白,ARIP1及ARIP2屬于激活素信號傳導(dǎo)負向調(diào)控蛋白,ARIP1主要在神經(jīng)細胞表達,而ARIP2組織學(xué)分布廣泛。實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)ARIP1和ARIP2可以共存于部分神經(jīng)細胞中,但ARIP1,2在同一神經(jīng)細胞中的表達及作用差異仍未完全闡明;前期研究還發(fā)現(xiàn)激活素A可以促進神經(jīng)元釋放神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT),但對其它神經(jīng)遞質(zhì)的釋放是否有影響也不清楚。因此,本研究選擇原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元及神經(jīng)母細胞瘤Neuro-2a細胞,探討ARIP1及ARIP2在同一神經(jīng)細胞中的表達和作用,同時進一步分析激活素A對神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響。1.ARIP1及ARIP2在體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元中的表達采用神經(jīng)元條件培養(yǎng)液體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,添加激活素A刺激12h及24h,結(jié)果發(fā)現(xiàn),激活素A作用12h時ARIP1及ARIP2 mRNA表達較對照細胞組均升高,而激活素作用24h時ARIP1 mRNA表達明顯降低,但ARIP2 mRNA表達水平仍高于對照細胞組。2.ARIP1及ARIP2在Neuro-2a細胞表達及作用比較2.1 ARIP1及ARIP2在體外培養(yǎng)Neuro-2a細胞的表達Neuro-2a經(jīng)激活素A刺激12h及24h,結(jié)果發(fā)現(xiàn),激活素A作用12h時ARIP1及ARIP2 mRNA表達升高,24h時ARIP1 m RNA表達明顯降低。進一步研究發(fā)現(xiàn),PMA、LPS及NGF分別處理Neuro-2a細胞12h,LPS促進ARIP1及ARIP2mRNA表達;PMA不影響ARIP1 mRNA,但促進ARIP2 mRNA表達;而NGF下調(diào)ARIP1 mRNA,不影響ARIP2 mRNA表達。2.2 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞ActRII及Smads表達的影響Neuro-2a細胞分別轉(zhuǎn)染ARIP1及ARIP2過表達質(zhì)粒,結(jié)果顯示過表達ARIP1對ARIP2 mRNA表達無明顯影響,但下調(diào)Smad3,4及ActRIIA mRNA表達。而過表達ARIP2則明顯下調(diào)ARIP1 mRNA表達,同時抑制Smad3,4及ActRIIA及ActRIIB mRNA表達。Western blotting檢測結(jié)果顯示過表達ARIP1及ARIP2均可下調(diào)Smad3及pSmad3水平,流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,過表達ARIP2可以顯著下調(diào)細胞表面ActRIIA及ActRIIB表達。2.3 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞形態(tài)及細胞活力的影響Neuro-2a細胞具有分化和增殖能力。研究采用ARIP1及ARIP2表達質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染Neuro-2a細胞,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染過表達ARIP1質(zhì)粒后細胞活力輕度下降,但與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對照組比無統(tǒng)計學(xué)差異,ARIP2過表達則輕度上調(diào)細胞活力,但也無統(tǒng)計學(xué)差異。過表達ARIP1對Neuro-2a細胞形態(tài)無明顯影響,但過表達ARIP2后不規(guī)則、有突起的細胞明顯增多。3.ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響實驗檢測了Neuro-2a細胞培養(yǎng)上清中的神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、GABA、DA、NE、Glu及Ach水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn),激活素A可以促進Neuro-2a細胞分泌5-HT、GABA、Glu,但卻抑制Ach釋放。過表達ARIP1及ARIP2均可抑制5HT及GABA的分泌,而對Glu無明顯影響;過表達ARIP1及ARIP2對激活素上調(diào)5-HT及GLU水平作用也起了抑制作用。綜上所述,ARIP1及ARIP2雖然在同一神經(jīng)細胞表達,但其動態(tài)表達及作用均存在差異。激活素A不僅可以促進神經(jīng)細胞5-HT釋放,也能促進Glu及GABA分泌。因此,本研究為進一步闡明激活素A神經(jīng)營養(yǎng)與保護作用及其信號傳導(dǎo)機制奠定了研究基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：激活素A 激活素受體相互作用蛋白 神經(jīng)元 Neuro-2a細胞 神經(jīng)遞質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 英文縮略詞12-13
• 第1章 文獻綜述13-21
• 1.1 激活素13-14
• 1.1.1 激活素的分子特征13
• 1.1.2 激活素的信號傳導(dǎo)13-14
• 1.2 激活素受體相互作用蛋白14-15
• 1.3 激活素與神經(jīng)發(fā)育的關(guān)系15-16
• 1.4 神經(jīng)遞質(zhì)16-19
• 1.4.1 乙酰膽堿16
• 1.4.2 谷氨酸16-17
• 1.4.3 去甲腎上腺素17
• 1.4.4 多巴胺17-18
• 1.4.5 5-羥色胺18
• 1.4.6 γ-氨基丁酸18-19
• 1.5 本課題的研究目的、內(nèi)容和特色19-21
• 1.5.1 研究目的19
• 1.5.2 研究內(nèi)容19-20
• 1.5.3 本課題的研究特色20-21
• 第2章 材料與方法21-30
• 2.1 實驗材料21-23
• 2.1.1 細胞21
• 2.1.2 實驗動物21
• 2.1.3 實驗試劑21-22
• 2.1.4 主要試劑的配制22
• 2.1.5 主要實驗儀器22-23
• 2.2 實驗方法23-29
• 2.2.1 培養(yǎng)板的準備23
• 2.2.2 小鼠海馬神經(jīng)元培養(yǎng)23
• 2.2.3 RT-PCR23-26
• 2.2.4 激活素A處理Neuro-2a細胞的ARIP1, 2 mRNA檢測流程26
• 2.2.5 Neuro-2a細胞瞬時轉(zhuǎn)染ARIP1及ARIP2過表達質(zhì)粒26-27
• 2.2.7 轉(zhuǎn)染ARIP1、ARIP2過表達質(zhì)粒后Neuro-2a細胞的形態(tài)學(xué)分析27
• 2.2.8 Western blotting檢測p-Smad3和Smad3蛋白27-28
• 2.2.9 流式細胞術(shù)分析細胞表面激活素受體表達28
• 2.2.10 ELISA法檢測神經(jīng)遞質(zhì)28-29
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)處理29-30
• 第3章 實驗結(jié)果30-41
• 3.1 ARIP1及ARIP2在小鼠海馬神經(jīng)元的表達30-31
• 3.2 ARIP1及ARIP2在小鼠Neuro-2a細胞的表達及作用比較31-38
• 3.2.1 ARIP1及ARIP2在Neuro-2a細胞中的表達31-32
• 3.2.2 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞Smads及ActRIIs mRNA表達的影響32-34
• 3.2.3 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞Smad3蛋白表達的影響34
• 3.2.4 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞ActRIIA及ActRIIB表達的影響34-36
• 3.2.5 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞活力的影響36
• 3.2.6 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞形態(tài)學(xué)變化的影響36-38
• 3.3 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2a細胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響38-41
• 3.3.1 激活素A對Neuro-2 細胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響38-39
• 3.3.2 ARIP1及ARIP2過表達對Neuro-2 細胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響39-41
• 第4章 討論41-44
• 1. ARIP1及ARIP2在組織中的表達與分布41-42
• 2. ARIP1及ARIP2在神經(jīng)細胞中的表達調(diào)控42
• 3. ARIP1及ARIP2作用的差異比較42-43
• 4. 激活素、ARIP1及ARIP2過表達對神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響43-44
• 第5章 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-50
• 作者簡介50-51
• 致謝51

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