本文關(guān)鍵詞：人源醛酮還原酶7A2融合蛋白的純化及其對苯代謝產(chǎn)物的催化活性

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【摘要】：目的使用FPLC系統(tǒng)純化人源醛酮還原酶(AKR)7A2融合蛋白,并檢測純化的AKR7A2蛋白對苯的代謝產(chǎn)物的催化活性。方法將含有His-AKR7A2的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21大腸桿菌,通過IPTG誘導(dǎo)AKR7A2融合蛋白的大量表達(dá);利用FPLC系統(tǒng)通過HiTrap親和柱和G25 Sephadex凝膠色譜柱純化AKR7A2融合蛋白,經(jīng)SDS-PAGE和Western blot鑒定。采用酶活性實驗檢測純化的重組AKR7A2蛋白對苯甲醛、雙苯醌和反向,反向-2,4-二烯-1,6-己二酮(MUC)的底物特異性。結(jié)果使用FPLC系統(tǒng)通過兩步純化法成功獲得重組的His-AKR7A2融合蛋白,純度高達(dá)98%。酶活性實驗結(jié)果顯示:重組AKR7A2蛋白對苯甲醛有中等親和力,對MUC親和力較高,對雙苯醌的親和力較低。結(jié)論成功純化了重組人源AKR7A2蛋白,并檢測了其對3種苯代謝產(chǎn)物的底物特異性,AKR很可能在苯的代謝途徑中扮演重要角色。
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生物制藥教研室;中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部;沈陽軍區(qū)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)情報科;
【關(guān)鍵詞】： 醛酮還原酶 蛋白純化 底物特異性
【基金】：留學(xué)人員科技活動擇優(yōu)資助項目(人社廳函[2012]258) 遼寧省科學(xué)技術(shù)計劃項目(2012225021)
【分類號】：R341
【正文快照】： 苯是環(huán)境污染物中廣泛存在的一種致癌物質(zhì),可引起非淋巴細(xì)胞性白血病等血液疾病,低劑量的苯還能引起白細(xì)胞及血小板減少[1]。苯的毒性大部分來源于它的代謝產(chǎn)物。苯代謝產(chǎn)物主要通過2種途徑產(chǎn)生:一種是通過對苯環(huán)的修飾,如苯甲醛和對苯醌,一種是通過開環(huán)反應(yīng),如反向,反向-2,4，

本文編號：663420