本文關(guān)鍵詞：BMP-14轉(zhuǎn)染脂肪來源干細胞后與軟骨細胞共培養(yǎng)的實驗研究

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【摘要】：目的研究BMP-14與軟骨細胞共同誘導(dǎo)脂肪來源干細胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向軟骨細胞分化是否具有協(xié)同作用,優(yōu)化軟骨組織工程種子細胞來源。方法取2只雄性新西蘭大白兔(體重1.5、2.0 kg)關(guān)節(jié)軟骨和皮下脂肪組織,分離、培養(yǎng)軟骨細胞和ADSCs,取第3代細胞進行實驗。對ADSCs行成骨(茜素紅染色)、成軟骨(阿利新藍染色)和成脂(油紅O染色)誘導(dǎo)鑒定。測定Ad-巨細胞病毒-BMP-14-內(nèi)部核糖體進入位點-人源化海腎綠色熒光蛋白1轉(zhuǎn)染的最佳感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI)并以其轉(zhuǎn)染ADSCs。實驗分為5組:A組,采用Transwell小室將BMP-14轉(zhuǎn)染的ADSCs與軟骨細胞共培養(yǎng)(1∶1);B組,采用Transwell小室將未轉(zhuǎn)染的ADSCs與軟骨細胞共培養(yǎng)(1∶1);C組,單純BMP-14轉(zhuǎn)染的ADSCs培養(yǎng);D組,單純軟骨細胞培養(yǎng);E組,單純ADSCs培養(yǎng)。培養(yǎng)3周后,取細胞采用阿利新藍法檢測糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量,Western blot檢測BMP-14和Ⅱ型膠原蛋白表達,RT-PCR檢測Sox-9基因表達。結(jié)果培養(yǎng)細胞經(jīng)鑒定提示為ADSCs。倒置熒光顯微鏡觀察示,MOI值為150時轉(zhuǎn)染效果最好。A、C組GAG含量、BMP-14和Ⅱ型膠原蛋白表達以及Sox-9基因表達均明顯高于其余3組,A組高于C組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);B、D組均明顯高于E組(P0.05),B、D組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 BMP-14與軟骨細胞能共同誘導(dǎo)并促進兔ADSCs向軟骨細胞分化,兩者之間具有協(xié)同作用。
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院整形燒傷科;遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院骨關(guān)節(jié)外科;
【關(guān)鍵詞】： 軟骨組織工程 脂肪來源干細胞 BMP- 軟骨細胞 共培養(yǎng) 兔
【分類號】：R329
【正文快照】： 軟骨組織因缺乏血供、細胞代謝緩慢,損傷后難以自行修復(fù)。軟骨組織工程學(xué)的發(fā)展,為采用組織工程軟骨修復(fù)軟骨缺損帶來了希望[1-3]。傳統(tǒng)軟骨組織工程研究常以自身軟骨細胞作為種子細胞,存在細胞來源不足等問題,限制了其臨床應(yīng)用。近年來,脂肪來源干細胞(adipose-derived stem

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本文編號：661331