本文關(guān)鍵詞：視黃酸信號對斑馬魚牙齒發(fā)育調(diào)控的初步研究

  更多相關(guān)文章： 斑馬魚 牙齒發(fā)育 視黃酸信號 神經(jīng)嵴

【摘要】：研究背景:人的一生目前只有兩個牙列,即乳牙列與恒牙列,在12-13歲恒牙列完全萌出之后,人類本身的牙齒就隨著使用的時間產(chǎn)生不可避免的磨耗。人類口齒的健康健全是消化系統(tǒng)發(fā)揮功能,為身體輸送營養(yǎng)的開端,但隨著人類壽命的延長、食物的多樣化發(fā)展,各種各樣的先天性和后天性因素使得不少患者的牙齒逐漸失去原有功能。而一旦恒牙缺失,我們沒有辦法進(jìn)行完整的牙齒再生,缺牙對于患者來說既是健康上的威脅,又是心理上的障礙。目前有學(xué)者把種植義齒形容為人類的“第三副牙齒”,誠然,與傳統(tǒng)可摘活動義齒或固定橋修復(fù)體相比,種植義齒是目前對正常牙傷害最小的修復(fù)手段,但其不可回避的具有一系列諸如對骨量及個體身體健康要求高、費(fèi)用昂貴、修復(fù)周期長等劣勢。隨著人們對于牙齒保健意識的提高,一副真正屬于個體的“第三副牙齒”成為了牙醫(yī)界亟待解決的難題和焦點(diǎn)。牙齒的發(fā)育與再生成為了極具研究價值的熱點(diǎn)科學(xué)。近年來,牙齒發(fā)育與再生的模式動物多選擇小鼠、小香豬、狗等哺乳動物,大量研究也帶來了我們對于牙齒的發(fā)生發(fā)育、遷移分化、組織間相互作用及牙齒硬組織的沉積形成與萌出、牙根的生長都有了不同程度的認(rèn)知。然而,哺乳動物具有一定的局限性,由于哺乳動物的胚胎發(fā)育在母體內(nèi)進(jìn)行,局部組織深埋于皮下或結(jié)締組織下,實驗與觀察都有一定的不便,實驗條件較為苛刻繁瑣,使得受精后數(shù)小時內(nèi)的最早期胚胎發(fā)育過程中所牽涉到的分子調(diào)控機(jī)制的探索遇到了一些壁壘。斑馬魚是一種新型卵生的模式動物,具備一系列研究牙齒發(fā)育的優(yōu)勢,因此本實驗選擇斑馬魚作為模式動物。視黃酸對脊椎動物整個生長發(fā)育過程都起著非常重要的調(diào)控作用,在牙齒的發(fā)育初萌上也起著舉足輕重的作用。本實驗視黃酸促進(jìn)模型主要是利用外源性視黃酸對各類魚系進(jìn)行培養(yǎng),視黃酸抑制模型利用raldh2合成酶抑制劑DEAB進(jìn)行外源性培養(yǎng)以抑制RA的合成,同時利用熱激蛋白過表達(dá)轉(zhuǎn)錄RA降解酶cyp26a1促進(jìn)視黃酸的分解,從而的到視黃酸缺乏或缺少的模型。在處理后的模型上進(jìn)行整胚原位雜交,檢測牙齒特異性蛋白的表達(dá)量。同時利用牙齒特異性熒光魚系觀察熒光表達(dá)的情況。目的:構(gòu)建Hsp-cyp26a1-GFP;cryaa-Venus重組質(zhì)粒,篩選RA降解酶cyp26a1編碼序列過表達(dá)轉(zhuǎn)基因魚系。探究加入外源性RA和阻斷體內(nèi)RA合成以及加速體內(nèi)RA降解對斑馬魚牙齒發(fā)育的影響。方法:本實驗首先構(gòu)建Hsp-cyp26a1-GFP;cryaa-Venus重組質(zhì)粒,從斑馬魚的c DNA文庫中克隆出cyp26a1的編碼序列,連接進(jìn)入熱激蛋白質(zhì)粒中。運(yùn)用顯微注射技術(shù)向單細(xì)胞期的斑馬魚胚胎動物極內(nèi)注射重組質(zhì)粒,重組質(zhì)粒將隨機(jī)整合到斑馬魚基因組內(nèi),經(jīng)數(shù)代繁育篩選獲得能夠穩(wěn)定遺傳的Hsp-cyp26a1-GFP;cryaa-Venus轉(zhuǎn)基因斑馬魚系。同時克隆四個神經(jīng)嵴的特異性標(biāo)記物的編碼序列:dlx2a,dlx2b,scpp5,barx1。TA克隆后得到PGEMT載體上的基因序列。測序得到片段插入方向,根據(jù)插入方向選擇sp6或t7 RNA聚合酶,進(jìn)行RNA合成轉(zhuǎn)錄。利用不同濃度RA及DEAB處理轉(zhuǎn)基因魚系Tg:dlx2b-GFP和AB Go野生型斑馬魚。熱激活cyp26a1后檢測體內(nèi)各牙齒特異性蛋白質(zhì)表達(dá)水平高低。結(jié)果:本實驗成功克隆了cyp26a1的轉(zhuǎn)錄本序列,經(jīng)顯微注射成功篩選出熱激蛋白過表達(dá)cyp26a1的魚系Tg:Hsp-cyp26a1-GFP;cryaa-Venus。同時獲得了4個基因的反義m RNA核酸探針。與未處理的二甲基亞砜對照組相較而言,經(jīng)過1×10-7?M視黃酸信號處理的barx1組、dlx2a在咽弓神經(jīng)嵴的表達(dá)明顯增強(qiáng),并有由咽弓神經(jīng)嵴向后段咽弓牙齒萌出位點(diǎn)遷移的趨勢,綠色熒光向周邊咽弓擴(kuò)散;4×10-7?M RA處理組胚胎致畸率和死亡率極高,3×10-7?M RA處理組1/3胚胎發(fā)育遲緩。DEAB處理組神經(jīng)嵴發(fā)育不良,barx1、dlx2a表達(dá)降低,dlx2b在牙齒位點(diǎn)的表達(dá)有所延遲。Cyp26a1經(jīng)過熱激活后能夠成為很好的內(nèi)源性加速RA降解的模型。實驗結(jié)果類似利用DEAB阻斷RA合成的結(jié)果,barx1的表達(dá)明顯降低,dlx2a表達(dá)發(fā)生滯后效應(yīng),dlx2b和scpp5的表達(dá)有所延遲。結(jié)論RA能夠通過調(diào)控咽弓神經(jīng)嵴發(fā)育過程,進(jìn)而調(diào)控牙齒發(fā)育前體細(xì)胞,最終達(dá)到調(diào)控牙齒發(fā)育的過程。
【關(guān)鍵詞】：斑馬魚 牙齒發(fā)育 視黃酸信號 神經(jīng)嵴
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R333.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-16
• 實驗一 熱激蛋白過表達(dá)視黃酸降解酶重組質(zhì)粒的構(gòu)建16-26
• 1 實驗材料16-17
• 2 實驗方法17-24
• 3 結(jié)果24-25
• 4 討論25-26
• 實驗二 Hsp-cyp26a1-GFP;cryaa-Venus轉(zhuǎn)基因魚系的構(gòu)建26-31
• 1 實驗材料26-27
• 2 實驗方法27-28
• 3 結(jié)果28-30
• 4 討論30-31
• 實驗三 外源性視黃酸信號的促進(jìn)與阻斷處理31-42
• 1 實驗材料31-32
• 2 實驗方法32-35
• 3 結(jié)果35-39
• 4 討論39-42
• 全文總結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 文獻(xiàn)綜述47-57
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 致謝57-59
• 碩士期間發(fā)表論文59

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周炳;趙美蓉;黃海鳳;;4種農(nóng)藥對斑馬魚胚胎的毒理研究[J];浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報;2008年02期

2 ;法國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)斑馬魚造血干細(xì)胞生成機(jī)理[J];廣西科學(xué)院學(xué)報;2010年01期

3 陳粉麗;張松林;李運(yùn)彩;;斑馬魚胚胎毒理學(xué)研究進(jìn)展[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年06期

4 劉在平;張松林;;斑馬魚在環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用[J];中國環(huán)境監(jiān)測;2011年04期

5 王雪;王希敏;劉可春;韓利文;袁延強(qiáng);;斑馬魚胚胎在毒理學(xué)研究中的應(yīng)用[J];山東科學(xué);2011年06期

6 劉麗麗;王健;王海勝;余凱敏;李國超;閆艷春;;斑馬魚轉(zhuǎn)基因平臺的建立[J];生物技術(shù)通報;2013年10期

7 朱琳,史淑潔;斑馬魚胚胎發(fā)育技術(shù)在毒性評價中的應(yīng)用[J];應(yīng)用生態(tài)學(xué)報;2002年02期

8 董武,楊景峰,王思珍,高原,解顏炯,馬國文;二VA英污染引起的特異性下頜短小—斑馬魚下頜形態(tài)學(xué)檢測[J];內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2005年03期

9 蔡翔,王捷,王穎;應(yīng)用胚胎檢測技術(shù)評價氟嗎啉對斑馬魚胚胎-幼體發(fā)育的影響[J];農(nóng)藥;2005年06期

10 張立鳳;鐘濤;桂永浩;;外源性視黃酸對斑馬魚心血管系統(tǒng)發(fā)育的影響[J];中國實驗動物學(xué)報;2006年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬雯雯;杭曉明;王巍;劉聰;孫野青;;模擬微重力影響斑馬魚胚胎發(fā)育的蛋白質(zhì)組特征[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會暨中國生理學(xué)會第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2009年

2 張利軍;史慧勤;彭雙清;;基于斑馬魚模式動物的阿霉素心臟毒性作用研究[A];2010年全國藥物毒理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

3 王晗;;斑馬魚生物鐘調(diào)節(jié)的分子遺傳和基因組機(jī)制[A];2011年全國時間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

4 林秀坤;;斑馬魚作為抗腫瘤藥物模型的分子基礎(chǔ)[A];第四屆中國腫瘤大會中國藥理學(xué)會腫瘤藥理專業(yè)委員會分會場學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

5 侯佳;桂永浩;張立鳳;王躍祥;宋后燕;鐘濤;;視黃酸缺乏對斑馬魚胚胎心臟發(fā)育的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國兒科中青年學(xué)術(shù)交流大會論文匯編（上冊）[C];2008年

6 陳錫強(qiáng);韓利文;王希敏;王思鋒;侯海榮;劉可春;;促滲劑氮酮對斑馬魚胚胎的透皮作用及其毒性影響(英文)[A];2012年中國藥學(xué)大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

7 于永利;楊景峰;王思珍;董武;;高殘留農(nóng)藥福美雙對斑馬魚胚胎體節(jié)以及脊索的影響[A];持久性有機(jī)污染物論壇2010暨第五屆持久性有機(jī)污染物全國學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

8 巴雅斯胡;楊景峰;于永利;王思珍;董武;;高殘留農(nóng)藥代森鋅誘導(dǎo)斑馬魚胚胎脊索變形[A];持久性有機(jī)污染物論壇2011暨第六屆持久性有機(jī)污染物全國學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

9 張利軍;郭家彬;苑曉燕;史慧勤;趙君;束玉磊;彭雙清;;應(yīng)用斑馬魚胚胎和幼魚評價布洛芬的心臟毒性[A];2013年（第三屆）中國藥物毒理學(xué)年會暨藥物非臨床安全性評價研究論壇論文摘要[C];2013年

10 朱小山;朱琳;李燕;端正花;;富勒烯(C_(60))對斑馬魚胚胎發(fā)育毒性的初步研究[A];第三屆全國環(huán)境化學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 劉妍;美國培育出終生透明的斑馬魚[N];中國漁業(yè)報;2008年

2 本報記者 滕繼濮;小小斑馬魚 大大有用處[N];科技日報;2010年

3 楓葉　編譯;篩選藥物：斑馬魚責(zé)任重大[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2012年

4 記者 熊琳暉 通訊員 孫慧;研究斑馬魚揭示器官再生之謎[N];長江日報;2013年

5 羅剛 李兵;斑馬魚破譯人類基因的先鋒[N];健康報;2004年

6 記者 李學(xué)梅;斑馬魚為治療白血病提新思路[N];新華每日電訊;2010年

7 本報記者 許琦敏;靜候那一點(diǎn)流星似的光亮[N];文匯報;2012年

8 本報記者 許琦敏;劉廷析 “掘?qū)殹卑唏R魚世界[N];文匯報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 管翊閎;核仁因子Def磷酸化修飾調(diào)控細(xì)胞周期和p53降解的研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 胡晶瑩;環(huán)境雌激素影響斑馬魚生殖系統(tǒng)發(fā)育機(jī)制的初步研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

3 趙婷;Karsch-Neugebauer綜合征斑馬魚模型的建立和行為學(xué)觀察[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 王健;新型斑馬魚模型在研究腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移和血管侵襲機(jī)制中的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2015年

5 王明勇;斑馬魚生物鐘基因per2突變體的構(gòu)建及在生物鐘系統(tǒng)中的功能分析[D];蘇州大學(xué);2014年

6 龔璐;p53及其異構(gòu)體△133p53/△113p53在人類細(xì)胞和斑馬魚中的功能及生物學(xué)意義研究[D];浙江大學(xué);2015年

7 郭翠翠;斑馬魚D3b基因結(jié)構(gòu)及其在胚胎發(fā)育中的作用研究[D];上海交通大學(xué);2014年

8 沈兵;致癌染料的生理毒性及分子機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

9 張慶友;斑馬魚Mil/s1pr2和vmhc基因的功能研究及藥源性心臟毒性模型的建立[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

10 楊梅;乙草胺對斑馬魚的發(fā)育和生殖內(nèi)分泌干擾機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔俊安;稀土對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響[D];青島科技大學(xué);2011年

2 吳二社;nano-TiO_2,nano-Ag對斑馬魚胚胎發(fā)育的毒理學(xué)研究[D];西北師范大學(xué);2012年

3 溫鼎聲;利用模式生物斑馬魚對化合物心臟毒性和急毒性篩選的研究[D];華南理工大學(xué);2012年

4 梁榮朝;丙烯酰胺對斑馬魚生物余能的影響及對其肝、鰓毒性的作用[D];哈爾濱商業(yè)大學(xué);2013年

5 余凱敏;毒死蜱對斑馬魚胚胎的毒性機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

6 羅茜;斑馬魚生長抑素-1基因靶向敲降和營救以及基于表達(dá)譜的胚胎發(fā)育功能分析[D];西南大學(xué);2015年

7 胡月陽;UBE2C基因在斑馬魚胚胎發(fā)育中的時空表達(dá)規(guī)律[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李國超;17β-雌二醇對斑馬魚的毒性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 車克鎧;岳城水庫生物監(jiān)測預(yù)警技術(shù)研究[D];河北工程大學(xué);2015年

10 石琰琰;以斑馬魚為模式動物研究轉(zhuǎn)錄因子Irf8及Pu.1在髓系白血病發(fā)生過程中的作用[D];西南大學(xué);2015年

，

本文編號：642750