本文關(guān)鍵詞：CM-Dil與DAPI聯(lián)合標記人羊膜上皮細胞的可行性研究

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【摘要】：目的建立人羊膜上皮細胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)的體外培養(yǎng)方法,并探討氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)與4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)對HAEC進行聯(lián)合標記示蹤的可行性。方法運用酶消化法獲取HAEC,收集第2代細胞,流式細胞儀檢測CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的表達率,SP免疫化學(xué)法鑒定HAEC。CM-Dil與DAPI對HAEC進行體外標記,熒光倒置顯微鏡下觀察1 d、7 d和14 d的標記情況,臺盼藍染色檢測細胞活力,CCK-8法檢測細胞增殖以明確聯(lián)合標記對體外培養(yǎng)HAEC生長特性的影響。結(jié)果 HAEC貼壁培養(yǎng)后呈扁平多角形,CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的陽性率分別為99.64%、2.21%、32.41%、0.84%、36.70%,細胞角蛋白Keratin陽性表達。HAEC在CM-Dil和DAPI聯(lián)合標記1 d后,熒光顯微鏡下可觀察到細胞膜和細胞核分別在不同波長下呈紅色和藍色熒光,標記率為100%;14 d后,經(jīng)傳代培養(yǎng)的HAEC熒光強度與1 d時相近,細胞形態(tài)無改變。臺盼藍染色顯示標記細胞存活率為96.8%~98.9%,CCK-8檢測標記細胞的增殖力較未標記組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 CM-Dil和DAPI可有效標記HAEC,染色簡單、無細胞毒性,熒光衰減較慢,可作為HAEC的標記及示蹤方法。
【作者單位】： 暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科;暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院眼科研究室;
【關(guān)鍵詞】： 人羊膜上皮細胞 氯甲基苯甲酰胺 ’ -二脒基--苯基吲哚 標記 示蹤
【基金】：國家自然科學(xué)青年基金(編號:81100637) 國家自然科學(xué)基金(編號:30872808)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 羊膜是胎盤最內(nèi)層的無血管、神經(jīng)和淋巴管的透明組織,無免疫原性和致瘤性[1],且來源廣泛,取材方便,無倫理學(xué)爭議�，F(xiàn)已有研究報道人羊膜上皮細胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)具有類似胚胎干細胞的分化能力[2],可用作胚胎干細胞的替代物[3-4]。故將其作為種子細胞用

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本文編號：642125