發(fā)布時間：2017-08-08 19:26

  本文關(guān)鍵詞：廣譜中和活性樣本功能性膜蛋白基因序列特征及中和表型分析

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【摘要】：研究背景中和抗體能阻斷病毒感染宿主靶細(xì)胞,是病毒疫苗的有效保護(hù)性組分。但目前研發(fā)的基于膜蛋白的HIV疫苗不能誘導(dǎo)廣譜有效的中和抗體應(yīng)答,這可能與膜蛋白基因的內(nèi)在特性有一定關(guān)系。探討HIV-1廣譜中和活性樣本膜蛋白基因序列及功能特征,以及功能性膜蛋白基因假病毒的中和表型,有助于理解機(jī)體免疫系統(tǒng)識別抗原及產(chǎn)生HIV-1廣譜中和抗體的機(jī)制,為設(shè)計能誘導(dǎo)廣譜中和抗體應(yīng)答反應(yīng)的免疫原提供參考依據(jù)。研究目的分析HIV-1感染者廣譜中和活性樣本功能性膜蛋白基因特征；分析功能性膜蛋白基因的假病毒對廣譜中和抗體及對自體、異體血漿的中和敏感性。研究方法篩選HIV-1感染者具有廣譜中和活性的樣本,擴(kuò)增全長膜蛋白基因,進(jìn)行克隆構(gòu)建及功能性鑒定。挑選代表性質(zhì)粒,與HIV-1骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T/17細(xì)胞制備假病毒,分別與HIV-1廣譜中和抗體、自身血漿和異體血漿進(jìn)行中和反應(yīng),分析假病毒的中和敏感性；同時對功能性質(zhì)粒進(jìn)行測序,應(yīng)用Bioedit、Mega、Geno2pheno等軟件分析env基因特征及其與廣譜中和活性相關(guān)的關(guān)鍵氨基酸變異。研究結(jié)果1、從具有廣譜中和活性的CBJC437、CBJC501、CBJC515三例感染者的不同時間點(diǎn)樣本中篩選了28個有代表性的功能性膜蛋白基因,其中CBJC437樣本15條、CBJC501樣本9條、CBJC515樣本4條。2、序列分析顯示所獲得的膜蛋白基因V1V2、V4區(qū)的基因距離差異顯著,V3、V5區(qū)差異小。功能性env基因全部呈CCR5嗜性,SGA序列多以CCR5嗜性為主,但隨時間推移,部分序列預(yù)測轉(zhuǎn)變?yōu)镃XCR4嗜性。3、廣譜中和單抗識別的關(guān)鍵位點(diǎn)氨基酸在所獲得的功能性env基因中存在不同類型和不同程度的突變。4、感染者各時間點(diǎn)功能性env基因構(gòu)建的假病毒對單抗2F5和10E8均敏感,對單抗2G12、4E10、12A21、PGT121、PGT135及VRC01的中和敏感性存在差異。5、樣本各時間點(diǎn)病毒多能被自身血漿中和,早期時間點(diǎn)的病毒對較晚時間點(diǎn)血漿的中和更為敏感。多數(shù)病毒對同亞型異體血漿的中和敏感。研究結(jié)論廣譜中和活性樣本功能性膜蛋白基因的假病毒對單抗2F5和10E8均敏感,對單抗2G12、4E10、12A21、PGT121、PGT135 及 VRCO1的中和敏感性存在差異。樣本各時間點(diǎn)病毒多能被自身血漿中和,早期時間點(diǎn)的病毒對較晚時間點(diǎn)血漿的中和更為敏感。多數(shù)病毒對同亞型異體血漿的中和敏感。
【關(guān)鍵詞】：人類免疫缺陷病毒 廣譜中和抗體 假病毒 突變
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮略詞表11-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-36
• 1. 主要儀器與試劑15-18
• 1.1. 主要儀器15-16
• 1.2. 主要試劑16-17
• 1.3. 細(xì)胞系及溶液17-18
• 2. 研究對象和實(shí)驗(yàn)方法18-33
• 2.1. 研究對象18
• 2.2. 病毒血漿RNA提取18-19
• 2.3. 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA19-21
• 2.4. 巢式PCR(nested-PCR)擴(kuò)增env基因21-23
• 2.5. env基因PCR產(chǎn)物鑒定23
• 2.6. env基因PCR產(chǎn)物純化回收23-24
• 2.7. 克隆構(gòu)建24-25
• 2.8. 提取質(zhì)粒25-26
• 2.9. 質(zhì)粒鑒定26
• 2.10. 功能性克隆篩選26-29
• 2.11. 功能性env質(zhì)粒及假病毒制備29-31
• 2.12. 假病毒滴定31
• 2.13. 中和實(shí)驗(yàn)分析31-33
• 3. 功能性env基因序列及SGA序列分析33-34
• 3.1. 系統(tǒng)進(jìn)化分析33-34
• 3.2. 嗜性及特征性氨基酸分析34
• 4. 病毒的中和敏感性分析34-35
• 5. 統(tǒng)計分析35-36
• 結(jié)果36-67
• 1. 研究對象基本信息36-37
• 2. env功能性膜蛋白基因及SGA序列特征分析37-53
• 2.1. 功能性env基因及SGA序列系統(tǒng)進(jìn)化分析37-42
• 2.2. 功能性env基因及SGA序列基因距離42-45
• 2.3. 功能性env基因V1-V5可變區(qū)序列長度及PNGS分析45
• 2.4. env基因SGA序列V1-V5可變區(qū)序列長度及PNGS分析45-46
• 2.5. V3區(qū)特征分析46-53
• 3. 中和表位關(guān)鍵氨基酸變異分析53-60
• 3.1. 功能性env基因中和表位關(guān)鍵氨基酸變異分析53-55
• 3.2. env基因SGA序列中和表位關(guān)鍵氨基酸變異分析55-60
• 4. 功能性env基因的中和表型60-67
• 4.1. 功能性env基因篩選60
• 4.2. 病毒對廣譜中和單抗的敏感性60-62
• 4.3. 病毒的自體血漿中和反應(yīng)62-64
• 4.4. 病毒的同亞型異體血漿中和反應(yīng)64-67
• 討論67-71
• 小結(jié)71-72
• 參考文獻(xiàn)72-75
• 綜述75-83
• 參考文獻(xiàn)80-83
• 個人簡介83-84
• 論文發(fā)表情況84-85
• 致謝85

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本文編號：641683