本文關(guān)鍵詞：產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素突變體構(gòu)建及其卵黃抗體制備

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【摘要】：目的制備特異性的產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin,CPA)卵黃抗體(yolk immunoglobulin,IgY)。方法利用定點(diǎn)突變技術(shù),將CPA第56位天冬氨酸和第68位組氨酸分別突變?yōu)榻z氨酸,構(gòu)建了重組表達(dá)載體pTIG-mCPAD56S和pTIG-mCPAH68S,將其轉(zhuǎn)化入E.coli Origami中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。用親和層析的方法對突變體蛋白進(jìn)行純化并對其活性及抗原性進(jìn)行檢測,將獲得的突變體蛋白分別免疫健康母雞,收集雞蛋;經(jīng)水稀釋法純化卵黃中IgY;用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測IgY效價(jià);通過篩選保護(hù)劑而選擇最佳的IgY凍干條件。結(jié)果與結(jié)論pTIG-mCPA在Origami表達(dá)菌株中得到高效表達(dá),經(jīng)驗(yàn)證,mCPAD56S和mCPAH68S均完全失去生物學(xué)活性同時(shí)保留抗原性;純化卵黃后得到較高純度的特異性IgY,其效價(jià)可達(dá)到1∶200 000;經(jīng)過IgY凍干條件的篩選,最終選擇不添加保護(hù)劑大量凍干IgY作為抗體的儲備。該研究為研制基于IgY抗體的檢測方法奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)研究生院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素 突變 IgY 重組表達(dá)
【基金】：全軍醫(yī)學(xué)科技“十二五”重大專項(xiàng)資助項(xiàng)目(AWS11C001)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens typeA)可引起人畜創(chuàng)傷性氣性壞疽和動物壞死性腸炎等疾病,其中該菌產(chǎn)生的α毒素(CPA)是最主要的致病因子。α毒素為相對分子質(zhì)量43×103的單鏈多肽,是一種Zn2+依賴性多功能金屬酶,其N端具有磷脂酶C(phospholipase C,PLC)活性,C端具

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本文編號：629449