本文關(guān)鍵詞：霍亂弧菌鞭毛蛋白單克隆抗體的制備及雙抗體夾心ELISA的建立

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【摘要】：目的制備霍亂弧菌鞭毛蛋白單克隆抗體(mAb)、建立雙抗體夾心ELISA并初步應(yīng)用于食品檢測。方法采用差速離心法提取霍亂弧菌Vc75菌株的鞭毛蛋白,并以此為抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效價(jià)達(dá)到1∶32 000時(shí),取脾細(xì)胞與生長良好的對數(shù)期Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。多次克隆化培養(yǎng)后獲得雜交瘤細(xì)胞株并制備腹水,純化后得到抗體。結(jié)果獲得6株持續(xù)、穩(wěn)定分泌抗霍亂弧菌鞭毛蛋白mAb的雜交瘤細(xì)胞株,命名為VcNo.1~VcNo.6,抗體效價(jià)高達(dá)1∶2×106。SDS-PAGE結(jié)果顯示,提取出的鞭毛蛋白相對分子質(zhì)量(M r)為44 000并且純度較高。采用VcNo.6抗體建立了霍亂弧菌雙抗體夾心ELISA,該方法的檢測靈敏度達(dá)到103CFU/mL菌液,通過采用100株霍亂弧菌和101株非霍亂弧菌進(jìn)行特異性實(shí)驗(yàn),100株霍亂弧菌呈陽性反應(yīng),101株非霍亂弧菌呈陰性反應(yīng),結(jié)果表明VcNo.6抗體具有良好的特異性。在基質(zhì)添加試驗(yàn)中,最低檢出限為1 CFU/g樣品。結(jié)論成功制備了霍亂弧菌鞭毛蛋白mAb,并將其應(yīng)用于雙抗體夾心ELISA,該方法的檢測靈敏度達(dá)到103CFU/mL菌液,與所測試的非霍亂弧菌沒有交叉反應(yīng)。
【作者單位】： 北京出入境檢驗(yàn)檢疫局;北京農(nóng)學(xué)院;河北出入境檢驗(yàn)檢疫局;北京大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 霍亂弧菌 鞭毛蛋白 單克隆抗體 雙抗體夾心ELISA
【基金】：科技部公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201110034)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 霍亂弧菌(Vibrio cholerae,Vc)是引起霍亂的病原菌,在世界上曾引起多次爆發(fā)流行,給人們的生命財(cái)產(chǎn)造成巨大的損失[1]�；魜y是全球的一大威脅,是烈性傳染病之一[2]。自然情況下,人類是霍亂弧菌的唯一易感者,主要通過被病原菌污染的水源或食物經(jīng)口傳染,臨床表現(xiàn)為劇烈的嘔吐、腹

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本文編號：629830