本文關(guān)鍵詞：RUNX3對BMP9誘導的間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響

  更多相關(guān)文章： 骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 間充質(zhì)干細胞 RUNX3 成骨分化

【摘要】：目的:研究和確認RUNX3對BMP9誘導的間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響。方法:BMP9腺病毒感染間充質(zhì)干細胞,通過實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測內(nèi)源性Runx3的基因水平,通過Western Blot檢測內(nèi)源性RUNX3蛋白的表達。構(gòu)建過表達RUNX3(Ad-RUNX3)和干擾RUNX3(Ad-siRUNX3)的腺病毒,通過RT-PCR進行驗證。利用過表達RUNX3(Ad-RUNX3)和干擾RUNX3腺病毒(Ad-siRUNX3)處理間充質(zhì)干細胞,通過堿性磷酸(ALP)染色和活性定量測定,檢測成骨早期指標ALP;用茜素紅S染色,檢測成骨晚期指標鈣鹽沉積。同時用流式細胞儀檢測RUNX3對BMP9誘導的間充質(zhì)干細胞增殖和周期的影響。利用RT-qPCR檢測成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Id1、Id2、Dlx5和Runx2的基因表達;利用Western Blot檢測DLX5和RUNX2的蛋白表達;通過Western Blot檢測RUNX3對經(jīng)典的BMPs/Smad信號通路中Smad1/5/8和非經(jīng)典的MAPK信號通路中p38和ERK1/2的變化。結(jié)果:BMP9可以使MSCs中RUNX3基因和蛋白表達升高(p0.05);過表達和干擾RUNX3都可以增強BMP9誘導的早期成骨指標ALP活性,增加S期細胞的比例以及上調(diào)成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Id1和Id2的基因表達(p0.05);過表達RUNX3可以增強BMP9誘導的晚期成骨指標鈣鹽沉積,而干擾RUNX3可以抑制BMP9誘導的晚期成骨指標鈣鹽沉積。過表達RUNX3促進BMP9誘導的成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子DLX5和RUNX2的基因和蛋白表達,干擾RUNX3抑制DLX5和RUNX2的基因和蛋白表達(p0.05)。過表達RUNX3促進BMP9誘導的Smad1/5/8的磷酸化,干擾RUNX3抑制BMP9誘導的Smad1/5/8的磷酸化,對總的Smad1/5/8蛋白水平無影響。RUNX3不影響B(tài)MP9誘導的p38、ERK1/2的磷酸化水平。結(jié)論:RUNX3在調(diào)控BMP9誘導間充質(zhì)干細胞向成骨分化過程中發(fā)揮重要作用,而且主要是通過影響經(jīng)典的BMPs/Smad信號通路來實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 間充質(zhì)干細胞 RUNX3 成骨分化
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 技術(shù)路線11-12
• 1 材料和方法12-22
• 2 結(jié)果22-33
• 3 討論33-36
• 全文總結(jié)36-37
• 參考文獻37-42
• 文獻綜述42-50
• 參考文獻46-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文51

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本文編號：627596