發(fā)布時間：2017-08-05 07:27

  本文關(guān)鍵詞：基于蓖麻毒素B鏈的新型黏膜免疫佐劑設(shè)計及靶向效果初步評價

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【摘要】：目的:利用自主知識產(chǎn)權(quán)抗體3E1,確定RTB與細胞特異性結(jié)合的活性肽部位,基因工程合成后,動物實驗評價綠色熒光蛋白在基于RTB活性肽靶向下在體內(nèi)的分布,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。方法:用生物信息學(xué)技術(shù),確定RTB與細胞特異性結(jié)合的活性肽部位;分子克隆技術(shù)構(gòu)建含不同肽的綠色熒光蛋白原核表達載體,實現(xiàn)肽-GFP融合蛋白在大腸桿菌中的高效、可溶性表達;動物實驗評價小鼠舌下口服肽-GFP融合蛋白后GFP在體內(nèi)的分布。結(jié)果:建立了自主知識產(chǎn)權(quán)單抗3E1與RTB相互作用的空間構(gòu)象,判定出四個活性區(qū)域,構(gòu)建了4個含不同活性肽的GFP原核表達載體,獲得了高純度蛋白;經(jīng)舌下口服免疫BALB/c小鼠后,免疫組化和流式細胞術(shù)證實,P1-GFP免疫組GFP和CD11c在不同組織中的分布與對照組有明顯區(qū)別。P1-GFP初次免疫后,GFP主要分布于空腸,再次免疫后,GFP主要集中于回腸、腸相關(guān)淋巴組織和小腸PP結(jié);初次免疫后CD11c+細胞主要分布于腸系膜淋巴結(jié),胃和空腸,再次免疫后腸系膜淋巴結(jié)中的CD11c+細胞不再占優(yōu)勢,空腸中CD11c+細胞明顯增加。結(jié)論:基于RTB的活性肽P1與GFP融合蛋白口服免疫小鼠后,P1-GFP經(jīng)P1肽的導(dǎo)向,初次和再次免疫后GFP在體內(nèi)的分布不同,再次免疫后范圍更廣。P1的導(dǎo)向使GFP直接進入小腸PP結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)兩個黏膜免疫應(yīng)答的主要誘導(dǎo)及效應(yīng)部位,利于免疫應(yīng)答的發(fā)生。
【作者單位】： 海軍總醫(yī)院檢驗科;海軍總醫(yī)院眼科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 蓖麻毒素B鏈 黏膜免疫 小分子肽 靶向分布
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.30872394)
【分類號】：R392
【正文快照】： 研究和開發(fā)能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生早期、高效和持久免疫應(yīng)答的、黏膜免疫佐劑是感染免疫和疫苗領(lǐng)域的熱點和重點[1-5]。蓖麻毒素(ricin)B鏈(RTB)含有兩個半乳糖結(jié)合部位,幾乎能與所有真核細胞上含半乳糖基的糖蛋白或糖酯結(jié)合。由于RTB與巨噬細胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞結(jié)合的這一獨特性質(zhì),有

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9 陳U，

本文編號：623674