發(fā)布時間：2017-08-02 02:01

  本文關鍵詞：靶向EGFR隱蔽表位的免疫毒素的制備及其對腫瘤細胞的特異性殺傷

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【摘要】：目的:制備靶向表皮生長因子受體(epithelial growth factor receptor,EGFR)隱蔽表位(287-302)的免疫毒素,并鑒定其生物學功能。方法:通過基因工程方法將抗EGFR(287-302)的806單鏈抗體(806 single-chain antibody fragment,806scFv)基因經(jīng)柔性肽與銅綠假單胞菌外毒素A(Pseudomonas exotoxin A,PEA)的截短形式PE38KDEL連接,構建原核表達載體pET-22b-806scFv-PE38KDEL并轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中,經(jīng)純化獲得該免疫毒素融合蛋白806scFv-PE38KDEL,ELISA和流式細胞術檢測其與EGFR的結合活性,間接免疫熒光檢測重組免疫毒素的內(nèi)化作用,CCK-8法檢測806scFv-PE38KDEL對人腦膠質瘤細胞U87MG和U87MG-EGFRvⅢ、表皮癌細胞A431、乳腺癌細胞MDA-MB-468、舌癌細胞CAL-27的細胞毒性。結果:成功構建重組免疫毒素806scFv-PE38KDEL,誘導表達的蛋白806scFv-PE38KDEL以包涵體形式存在,經(jīng)純化后的純度95%,經(jīng)SDS-PAGE和Western blotting鑒定為目的蛋白。806scFv-PE38KDEL能EGFRvⅢ胞外段蛋白結合,還能與外源性表達EGFRvⅢ的腫瘤細胞和高表達EGFR的腫瘤細胞相結合,而與表達低水平EGFR的腫瘤細胞不結合。806scFv介導了重組免疫毒素的內(nèi)化。806scFv-PE38KDEL對靶細胞有明顯的殺傷作用,對過表達EGFRvⅢ的U87MG-EGFRvⅢ細胞IC50值為(5.85±0.03)ng/ml,對EGFR高表達細胞MDA-MB-468、A431、CAL-27的IC50值分別為(162.80±0.06)、(75.72±0.04)、(123.70±0.03)ng/ml。在1μg/ml的質量濃度下,相比PBS對照組,806scFv-PE38KDEL對U87MG-EGFRvⅢ、MDA-MB-468、A431和CAL-27細胞增殖的抑制率均顯著增高[(98.67±0.07)%vs(2.45±2.85)%、(86.26±1.01)%vs(0.48±1.76)%、(96.72±0.16)%vs(1.33±1.31)%、(96.29±0.30)%vs(2.00±0.60)%,均P0.01],而對U87MG細胞幾乎沒有抑制作用[(3.59±2.09)%vs(0.19±0.95),P0.05]。結論:本研究所制備的靶向EGFR(287-302)表位的重組免疫毒素806scFv-PE38KDEL能特異地結合并殺傷EGFRvⅢ或EGFR高表達的腫瘤細胞。
【作者單位】： 上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院上海市腫瘤研究所癌基因及相關基因國家重點實驗室;
【關鍵詞】： 表皮生長因子受體 隱蔽表位 免疫毒素 單鏈抗體 銅綠假單胞菌外毒素A 腫瘤
【基金】：上海市科委生物醫(yī)藥重點科技攻關項目資助(No.10431903700) “十二五”國家重大新藥創(chuàng)制專項資助(No.2012ZX09103301-005)~~
【分類號】：R392.4
【正文快照】： 重組免疫毒素是利用基因工程技術將具有靶向作用的抗體、配體或細胞因子與毒素相偶聯(lián)的復合物,又被稱為“生物導彈”[1]。目前免疫毒素在腫瘤治療中得到了廣泛的研究和應用,并取得了良好的效果[2-3]。免疫毒素由于毒性很強,因此如何避免或盡量減少免疫毒素上的抗體部分與正常

【參考文獻】

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【共引文獻】

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【相似文獻】

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3 唐U單

本文編號：607107