本文關(guān)鍵詞：人源可溶性B淋巴細(xì)胞刺激因子在大腸埃希菌中的類(lèi)泛素蛋白融合表達(dá)及鑒定

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【摘要】：目的 B淋巴細(xì)胞刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)作為腫瘤壞死因子(tumor necrosing factor,TNF)家族的成員,在B細(xì)胞增殖和成熟方面具有重要作用,其缺陷和過(guò)表達(dá)均能引起機(jī)體免疫失衡,誘發(fā)自身免疫性疾病,因此獲得純化BAFF蛋白對(duì)研究其功能尤為重要。文中采用類(lèi)泛素蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)融合表達(dá)系統(tǒng),構(gòu)建pET28a/SUMO-BAFF表達(dá)載體,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)和酶切獲得純度較高的人源B淋巴細(xì)胞刺激因子(human soluble BAFF,hsBAFF)蛋白,為進(jìn)一步研究其免疫調(diào)節(jié)作用奠定了基礎(chǔ)。方法 Over-lap PCR方法連接hsBAFF和SUMO基因,構(gòu)建融合蛋白表達(dá)載體pET28a/SUMO-BAFF,測(cè)序鑒定后轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌,經(jīng)半乳糖苷誘異劑(isopropul-betaD-thiogalactoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)和Ni2+-IDA Sepharose CL-6B親和層析柱純化蛋白SUMO-hsBAFF,后經(jīng)SUMO特異性蛋白酶切割和Ni2+-IDA-Sepharose CL-6B親和層析柱純化獲得hsBAFF蛋白。結(jié)果測(cè)序證實(shí)pET28a/SUMO-BAFF表達(dá)載體構(gòu)建成功,SDS-PAGE與Western blot鑒定獲得純化的融合蛋白SUMO-hsBAFF和經(jīng)酶切后高純度的蛋白hsBAFF。結(jié)論 SUMO融合表達(dá)系統(tǒng)能獲得高表達(dá)的可溶性目的蛋白,純化過(guò)程簡(jiǎn)單、高效,為進(jìn)一步研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和藥物開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像科;
【關(guān)鍵詞】： B淋巴細(xì)胞刺激因子 類(lèi)泛素蛋白 大腸埃希菌 表達(dá)
【基金】：南京軍區(qū)南京總醫(yī)院科研基金(2012042)
【分類(lèi)號(hào)】：R346
【正文快照】： 0引言BAFF是一種細(xì)胞因子,作為T(mén)NF家族的第17位成員,它能與B淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合,誘導(dǎo)其增殖、分化并分泌IgG、IgA和IgM等免疫球蛋白,在體液免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用[1-2],其過(guò)表達(dá)會(huì)引起自身免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及干燥綜合征等)的發(fā)生與發(fā)展[3-5]。實(shí)

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本文編號(hào)：604746